| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 红曲菌 | 第13-17页 |
| ·红曲及红曲菌 | 第13页 |
| ·红曲菌的分类 | 第13-15页 |
| ·红曲菌代谢产物 | 第15-17页 |
| ·γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA) | 第15页 |
| ·红曲色素 | 第15-16页 |
| ·莫纳可林(monacolin)类物质 | 第16页 |
| ·酶类活性物质 | 第16-17页 |
| ·其它药理活性物质 | 第17页 |
| 2 红曲菌代谢产物-GABA | 第17-22页 |
| ·GABA的结构及理化性质 | 第17-18页 |
| ·GABA的合成代谢机制 | 第18-19页 |
| ·GABA的分布及制备 | 第19-21页 |
| ·GABA的分布 | 第19-20页 |
| ·GABA的制备 | 第20-21页 |
| ·GABA的生理功能 | 第21-22页 |
| ·降血压功能 | 第21页 |
| ·健脑功能 | 第21页 |
| ·调节心律失常 | 第21-22页 |
| ·治疗癫痫 | 第22页 |
| ·其它功能 | 第22页 |
| ·GABA的测定方法 | 第22页 |
| 3 红曲菌分子生物学研究 | 第22-24页 |
| ·红曲菌遗传转化方法 | 第23页 |
| ·红曲菌基因文库的构建 | 第23-24页 |
| ·红曲菌功能基因的研究 | 第24页 |
| 4 本课题研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 红曲菌转化库中GABA突变子的筛选 | 第25-35页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要仪器与设备 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-28页 |
| ·菌种活化 | 第26页 |
| ·红曲的制备 | 第26页 |
| ·红曲中GABA的提取 | 第26页 |
| ·GABA的薄层色谱(TLC)分析 | 第26-27页 |
| ·GABA的高效液相色谱(HPLC)分析 | 第27页 |
| ·标准液及衍生剂 | 第27页 |
| ·样品处理及柱前衍生 | 第27页 |
| ·色谱条件 | 第27页 |
| ·桔霉素的高效液相色谱(HPLC)分析 | 第27-28页 |
| ·红曲中桔霉素的提取 | 第27-28页 |
| ·HPLC分析 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-33页 |
| ·GABA提取方法比较 | 第28-29页 |
| ·GABA的薄层色谱分析 | 第29-31页 |
| ·条件研究 | 第29页 |
| ·GABA突变子TLC结果 | 第29-31页 |
| ·HPLC分析 | 第31-33页 |
| ·标准曲线的绘制及精密度分析 | 第31页 |
| ·方法的准确度及精密度分析 | 第31-32页 |
| ·突变子的HPLC分析 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 红曲菌GABA相关基因的TAIL-PCR扩增 | 第35-47页 |
| 1 材料 | 第35-36页 |
| ·菌种 | 第35页 |
| ·酶、试剂盒和培养基 | 第35-36页 |
| ·酶和试剂盒 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-42页 |
| ·几种试剂的配制 | 第36页 |
| ·红曲菌基因组的制备 | 第36-37页 |
| ·突变子的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·T-DNA插入位点侧翼序列的TAIL-PCR扩增 | 第38-41页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·反应体系及反应条件 | 第38-41页 |
| ·TAIL-PCR产物纯化 | 第41页 |
| ·TAIL-PCR产物的连接、转化及测序 | 第41-42页 |
| ·连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·转化 | 第42页 |
| ·大肠杆菌阳性克隆子的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·测序分析 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·突变子的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·T-DNA插入位点侧翼序列的TAIL-PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·TAIL-PCR扩增产物的测序及序列功能分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 RNA干扰验证805~#突变子T-DNA插入位点基因cDNA功能 | 第47-63页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| ·菌株与质粒 | 第47页 |
| ·试剂及培养基 | 第47-49页 |
| ·酶及试剂盒 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·几种溶液的配制 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-55页 |
| ·干扰载体茎环结构的设计 | 第49-53页 |
| ·内含子和反义链的融合PCR过程 | 第50-51页 |
| ·含茎环结构干扰载体的构建 | 第51-53页 |
| ·RNAi完整干扰载体的构建 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导的干扰载体的转化 | 第54-55页 |
| ·pCSCAIS转化农杆菌EHA105 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化红曲菌 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-62页 |
| ·RNAi载体的验证 | 第55-60页 |
| ·内含子和反义链的Fusion-PCR扩增 | 第55-56页 |
| ·含茎环结构的载体pSC4SIA的构建 | 第56-59页 |
| ·完整RNAi载体的构建 | 第59-60页 |
| ·含pCSCAIS的农杆菌EHA105的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·含pCSCAIS的农杆菌EHA105转化红曲菌M-7及转化子验证 | 第60-62页 |
| ·发生RNAi的转化子的筛选 | 第60页 |
| ·发生RNAi的转化子的PCR验证 | 第60-61页 |
| ·R30红曲GABA的测定 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 1 结论 | 第63页 |
| 2 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录1 TAIL-PCR测序结果 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
