| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一部分. 几种匍匐翦股颖离体再生体系的建立与遗传转化研究 | 第14-59页 |
| I. 文献综述 | 第14-29页 |
| 1. 草坪草遗传转化的研究进展 | 第15页 |
| 2. 草坪草遗传转化的主要方法 | 第15-21页 |
| ·基因枪转化法 | 第15-19页 |
| ·影响基因枪转化的因素 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导法 | 第19-20页 |
| ·原生质体转化法 | 第20-21页 |
| ·硅碳纤维介导法 | 第21页 |
| 3. 草坪草遗传转化的报告基因和选择标记基因 | 第21-25页 |
| ·报告基因 | 第21-23页 |
| ·选择标记基因 | 第23-25页 |
| 4 转基因草坪草的分子生物学检测 | 第25页 |
| 5 外源基因在转基因草坪草中的整合和表达 | 第25-27页 |
| ·外源基因在转基因草坪草中的整合 | 第25-26页 |
| ·外源基因在转基因草坪草中的表达 | 第26-27页 |
| 6 草坪草遗传转化中存在的主要问题和展望 | 第27-28页 |
| 7. 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| II. 材料与方法 | 第29-36页 |
| 1. 几种匍匐翦股颖成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·实验步骤 | 第29页 |
| 2. 几种匍匐翦股颖的遗传转化研究 | 第29-32页 |
| ·植物材料 | 第29-30页 |
| ·匍匐翦股颖遗传转化过程中所用的培养基 | 第30页 |
| ·质粒的提取、检测和酶切分析 | 第30-32页 |
| ·质粒结构 | 第30页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·质粒 DNA的电泳检测 | 第31页 |
| ·紫外分光光度法测定质粒DNA含量 | 第31页 |
| ·质粒DNA的酶切分析 | 第31-32页 |
| 3. 基因枪法介导的遗传转化 | 第32-35页 |
| ·金粒的制备 | 第32页 |
| ·材料的渗透处理和微弹轰击 | 第32-33页 |
| ·转化体的筛选及植株的再生 | 第33页 |
| ·再生植株的分子鉴定 | 第33-35页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第34-35页 |
| 4. 农杆菌介导的遗传转化 | 第35-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第35页 |
| ·胚性愈伤组织的转化 | 第35-36页 |
| ·再生植株基因组DNA的提取及PCR检测 | 第36页 |
| III. 结果与分析 | 第36-44页 |
| 1. 几种匍匐翦股颖离体再生体系的建立 | 第36-38页 |
| ·匍匐翦股颖胚性愈伤组织的诱导 | 第36-37页 |
| ·体细胞胚的发生过程 | 第37-38页 |
| ·胚性愈伤组织的分化与植株再生 | 第38页 |
| 2. 利用基因枪法将Na~+/H~+反向转运蛋白基因导入匍匐翦股颖 | 第38-42页 |
| ·质粒DNA的酶切分析 | 第38-39页 |
| ·基因枪轰击后转基因植株的筛选 | 第39-42页 |
| ·硫酸卡那霉素对胚性愈伤组织的筛选效果 | 第40页 |
| ·硫酸卡那霉素对再生植株的筛选效果 | 第40页 |
| ·基因枪介导的转化植株的PCR检测分析 | 第40-42页 |
| 3. 农杆菌介导的Na~+/H~+反向转运蛋白基因导入匍匐翦股颖中的研究 | 第42-44页 |
| ·质粒DNA的酶切分析 | 第42页 |
| ·农杆菌侵染后的转基因植株筛选 | 第42-44页 |
| ·硫酸卡那霉素对胚性愈伤组织的筛选 | 第42页 |
| ·硫酸卡那霉素对再生植株的筛选 | 第42页 |
| ·农杆菌介导的转化植株的PCR检测分析 | 第42-44页 |
| IV 讨论 | 第44-49页 |
| 1. 几种匍匐翦股颖离体再生体系的建立 | 第44-46页 |
| ·不同激素浓度对胚性愈伤组织诱导的影响 | 第44-45页 |
| ·胚性愈伤组织的分化与再生 | 第45-46页 |
| 2. 匍匐翦股颖遗传转化研究 | 第46-49页 |
| ·基因枪介导的Na~+/H~+反向转运蛋白基因转移 | 第46-47页 |
| ·农杆菌介导的Na~+/H~+反向转运蛋白基因转移 | 第47页 |
| ·基因枪法与农杆菌法在匍匐翦股颖遗传转化过程中的比较 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-59页 |
| 第二部分 匍匐翦股颖Na~+/H~+反向转运蛋白基因的克隆与序列分析 | 第59-108页 |
| 1. 文献综述 | 第59-77页 |
| ·盐分过多对植物的伤害作用 | 第59-60页 |
| ·植物耐盐的机理 | 第60-63页 |
| ·盐胁迫条件下植物的渗透调节机制 | 第61页 |
| ·盐胁迫对代谢途径的影响 | 第61-62页 |
| ·盐离子的区隔化 | 第62页 |
| ·盐分对质膜透性的影响 | 第62页 |
| ·盐渍条件下的拒盐和离子选择吸收现象 | 第62-63页 |
| ·近年来克隆的部分盐诱导基因及转耐盐相关基因植物 | 第63页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白的研究进展 | 第63-73页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白的发现 | 第63-65页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白的特征 | 第65-67页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白与植物耐盐性的关系 | 第67-69页 |
| ·Na~+外排 | 第67-68页 |
| ·Na~+在液泡内的区隔化 | 第68-69页 |
| ·反向转运蛋白的分子生物学特征 | 第69-73页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白基因的克隆 | 第69-70页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白基因的表达调控 | 第70-71页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白的保守性 | 第71-73页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白基因的遗传转化研究 | 第73页 |
| ·基因克隆(序列克隆法)的策略 | 第73-76页 |
| ·根据已知序列克隆基因 | 第73-74页 |
| ·根据跨种序列同源性克隆植物基因 | 第74页 |
| ·基因全长的获取 | 第74-76页 |
| ·本研究的内容及技术路线 | 第76-77页 |
| ·研究内容 | 第76页 |
| ·技术路线 | 第76-77页 |
| 2 材料与方法 | 第77-86页 |
| ·材料 | 第77-79页 |
| ·翦股颖材料 | 第77页 |
| ·生化试剂 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77-78页 |
| ·菌株和质粒 | 第78-79页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第79页 |
| ·种子的灭菌 | 第79页 |
| ·无菌苗的萌发 | 第79页 |
| ·盐胁迫 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-86页 |
| ·总RNA的提取与纯化 | 第79-81页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第81页 |
| ·引物的设计与合成 | 第81-82页 |
| ·PCR扩增 | 第82-83页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第83-84页 |
| ·DNA片段与克隆载体的连接 | 第84页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第84页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第84-85页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第85页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第85-86页 |
| ·重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第86页 |
| ·中间序列的测定 | 第86页 |
| 3 结果与分析 | 第86-95页 |
| ·简并引物的设计 | 第86-89页 |
| ·翦股颖总RNA的提取 | 第89-90页 |
| ·PCR扩增结果 | 第90-91页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第91页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第91-95页 |
| 4 讨论 | 第95-100页 |
| ·翦股颖总RNA的提取 | 第95-96页 |
| ·RNA酶的消除 | 第95-96页 |
| ·翦股颖总RNA的质量 | 第96页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第96-97页 |
| ·测序原理与结果 | 第97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| ·后续实验设计 | 第98-100页 |
| ·翦股颖Na~+/H~+反向转运蛋白基因cDNA全长序列的获得 | 第98-99页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白基因表达分析 | 第99页 |
| ·Na~+/H~+反向转运蛋白基因的转化及其功能的确定 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 图版说明 | 第108-109页 |
| 图版 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
