| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 IL-10的产生及分子生物学特点 | 第11-12页 |
| 2 IL-10受体 | 第12-13页 |
| 3 IL-10的生物学作用 | 第13-14页 |
| ·免疫抑制作用 | 第13-14页 |
| ·免疫促进作用 | 第14页 |
| ·IL-10与其它细胞因子相互作用 | 第14页 |
| 4 IL-10的作用机理 | 第14-15页 |
| 5 IL-10的相关临床研究 | 第15-19页 |
| ·IL-10在人医上的应用进展 | 第15-18页 |
| ·IL-10与炎症 | 第15-16页 |
| ·IL-10与肿瘤 | 第16-17页 |
| ·IL-10与器官移植 | 第17-18页 |
| ·IL-10在兽医生产上的应用进展 | 第18-19页 |
| 6 小结 | 第19-20页 |
| 第一章 荣昌猪、内江猪IL-10基因的克隆与序列分析 | 第20-35页 |
| 1 材料 | 第20-23页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·溶液配制 | 第20-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第21页 |
| ·质粒提取(Triton法)所用溶液 | 第21页 |
| ·细胞培养用液 | 第21页 |
| ·RNA提取试剂配制 | 第21-22页 |
| ·克隆试剂的配制 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| ·荣昌猪、内江猪外周血淋巴细胞的分离、培养及白细胞介素10的诱生 | 第23页 |
| ·荣昌猪、内江猪外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第23页 |
| ·荣昌猪、内江猪白细胞介素10基因的RT-PCR扩增 | 第23-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| ·RT-PCR | 第24页 |
| ·电泳检测 | 第24-25页 |
| ·白细胞介素-10基因的克隆及鉴定 | 第25-28页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5a的制备 | 第25页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第25页 |
| ·连接转化 | 第25-26页 |
| ·PIL-10质粒鉴定 | 第26-28页 |
| ·序列测定 | 第28页 |
| ·荣昌猪、内江猪白介素10基因生物信息学分析 | 第28页 |
| ·PIL-10基因多重序列比较分析 | 第28页 |
| ·PIL-10核苷酸序列同源性比较与分析 | 第28页 |
| ·PIL-10基因的核苷酸序列的翻译 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-33页 |
| ·荣昌猪、内江猪IL-10基因的RT-PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第30-31页 |
| ·荣昌猪、内江猪白细胞介素10基因生物信息学分析 | 第31-33页 |
| ·PIL-10基因多重序列比较分析结果 | 第31页 |
| ·不同物种间IL-10基因同源性分析 | 第31-32页 |
| ·荣昌猪、内江猪IL-10编码氨基酸序列比较 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 荣昌猪IL-10基因的原核表达研究 | 第35-51页 |
| 1 材料 | 第35-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·包涵体提取与洗涤所用溶液 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-41页 |
| ·PET-32a(+)-PIL-10表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·亚克隆成熟蛋白基因引物设计 | 第36页 |
| ·质粒的提取: | 第36-37页 |
| ·亚克隆成熟蛋白荣昌猪IL-10基因 | 第37页 |
| ·含有荣昌猪IL-10成熟蛋白基因原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·含有荣昌猪IL-10成熟蛋白基因的表达载体PET-32a(+)-PIL-10转化表达菌BL21(DE3) | 第38页 |
| ·PET-32a(+)-PIL-10鉴定 | 第38页 |
| ·重组PET-32a(+)-PIL-10的表达 | 第38-40页 |
| ·阳性克隆菌的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| ·PET-32a(+)-PIL-10表达鉴定 | 第39页 |
| ·融合蛋白表达产物免疫印迹分析(Western blotting) | 第39-40页 |
| ·PET-32a(+)-PIL-10重组表达产物生物学活性的测定 | 第40-41页 |
| ·包涵体蛋白的提取 | 第40-41页 |
| ·PET-32a(+)-PIL-10蛋白含量的测定 | 第41页 |
| ·重组表达产物生物学活性测定 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·重组表达质粒PET-32a(+)-PIL-10的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·重组菌的转录检测结果 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白的表达量分析 | 第44页 |
| ·融合蛋白表达产物Western Blotting检测 | 第44-45页 |
| ·重组猪IL-10的生物学活性检测结果 | 第45-46页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第45-46页 |
| ·重组猪IL-10的生物学活性检测 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-51页 |
| ·关于信号肽和原核表达 | 第46-48页 |
| ·关于SDS-PAGE电泳 | 第48页 |
| ·关于包涵体 | 第48-49页 |
| ·关于PIL-10蛋白生物活性的检测 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
