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反义鲨烯合酶基因表达对青蒿素生物合成的影响

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-13页
第一章 青蒿素及相关代谢途径研究进展第13-24页
   ·植物类异戊二烯代谢途径的研究进展第13-19页
     ·异戊烯基焦磷酸(IPP)和二甲基丙烯基焦磷酸(DMAPP)的生物合成第14-17页
     ·HMG-COA 还原酶(HMGR)第17-18页
     ·鲨烯合酶(SQS)第18-19页
   ·青蒿素的生物合成研究进展第19-23页
   ·本论文研究目的及意义第23-24页
第二章 实验材料和方法第24-38页
   ·实验材料第24-25页
     ·菌株和质粒第24页
     ·植物材料第24页
     ·试剂第24-25页
   ·实验方法第25-38页
     ·质粒提取第25-26页
     ·DNA 的酶切和连接反应第26页
     ·PCR 反应第26-27页
     ·PFU PCR 产物平末端加A 尾第27页
     ·T-A 克隆与蓝白筛选第27页
     ·PCR 扩增片段或限制性内切酶酶切片段回收(玻璃奶法)第27-28页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化(CACL_2 法)第28页
     ·液氮冻溶法制备农杆菌感受态细胞及转化第28-29页
     ·青蒿的遗传转化第29页
     ·植物基因组DNA 的提取第29-31页
       ·改良的酚/SDS 法第29-30页
       ·改良的CTAB 法第30-31页
     ·转基因植物的SOUTHERN印迹杂交第31-33页
       ·DNA 的的酶切、电泳及转膜第31-32页
       ·杂交第32页
       ·洗膜第32-33页
     ·植物总RNA 提取第33-34页
       ·Trizol 法第33页
       ·SV total RNA isolation systerm(Promega)第33-34页
     ·RNA 电泳第34-35页
     ·RT-PCR 检测(TAKARA RNA PCR KIT)第35-36页
     ·GUS 染色第36页
     ·转基因青蒿中鲨烯含量的测定第36页
     ·青蒿素含量的测定第36-38页
       ·青蒿素的提取第36-37页
       ·青蒿素的测定第37-38页
第三章 滤纸对青蒿丛生芽诱导及遗传转化的影响第38-48页
   ·材料与方法第39-41页
     ·植物材料和滤纸第39页
     ·农杆菌菌株和载体第39页
     ·培养基第39-40页
     ·青蒿丛生芽的诱导第40页
       ·滤纸对青蒿丛生芽诱导的影响第40页
       ·滤纸对外植体不同部位的作用效果第40页
     ·青蒿的转化第40-41页
       ·农杆菌活化第40页
       ·青蒿叶片的浸染和共培养第40-41页
       ·抗性丛生芽的诱导第41页
     ·转基因青蒿的PCR 检测第41页
     ·转基因青蒿的GUS 染色第41页
   ·实验结果第41-46页
     ·滤纸对青蒿丛生芽诱导率的影响第41-43页
     ·滤纸对叶片不同部位的影响效果第43页
     ·滤纸对抗性丛生芽诱导的影响第43-44页
     ·抗性植株的生根第44-45页
     ·PCR 检测第45页
     ·GUS 染色第45-46页
   ·讨论第46-48页
第四章 反义鲨烯合酶基因表达对青蒿素生物合成的影响第48-58页
   ·材料和方法第49-52页
     ·植物材料第49页
     ·反义鲨烯合酶基因植物表达载体的构建第49-50页
     ·青蒿转化及转化植株的再生第50-51页
     ·转基因青蒿的PCR 检测第51页
     ·转基因青蒿的SOUTHERN杂交检测第51页
     ·RT-PCR 半定量检测第51-52页
     ·鲨烯含量的检测第52页
     ·转基因青蒿青蒿素含量的检测第52页
   ·实验结果第52-56页
     ·青蒿转基因株系的获得第52-53页
     ·转基因青蒿的PCR 鉴定第53-54页
     ·转基因青蒿的SOUTHERN杂交鉴定第54-55页
     ·转基因青蒿的RT-PCR 检测第55页
     ·转基因青蒿鲨烯含量的检测第55-56页
     ·转基因青蒿青蒿素含量的检测第56页
   ·讨论第56-58页
参考文献第58-65页
致谢第65-66页
个人简历第66页

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