| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| 一 前言 | 第7-9页 |
| 二 实验材料与方法 | 第9-23页 |
| (一) 实验材料 | 第9-13页 |
| 1. 主要化学试剂及实验材料 | 第9页 |
| 2. 工具酶、分子量标准及试剂盒 | 第9-10页 |
| 3. 菌株与质粒载体 | 第10-11页 |
| 4. 细胞系 | 第11-12页 |
| 5. 培养基 | 第12页 |
| 6. 引物合成及序列 | 第12页 |
| 7. 主要仪器和设备 | 第12-13页 |
| 8. DNA序列分析软件 | 第13页 |
| (二) 实验方法 | 第13-23页 |
| 1. 大肠杆菌基因组的提取 | 第13-14页 |
| 2. 载体质粒的构建 | 第14-16页 |
| 3. 细胞培养及真核表达载体转染 | 第16-18页 |
| 4. Western Blot蛋白印迹杂交 | 第18-19页 |
| 5. 细胞总 RNA提取 | 第19-20页 |
| 6. 利用生物素/亲和素亲和力的RNA结合蛋白的核糖核蛋白分离方法 | 第20-23页 |
| 三 实验结果 | 第23-37页 |
| (一) 构建纯化核糖核蛋白复合体的载体系统 | 第23-30页 |
| 1. BAP_(1,2)标签基因片断的人工合成及pcDNA3.1(+)—BAP_(1,2)质粒的构建 | 第24-26页 |
| 2. pcDNA3.1(+)—BirA质粒的构建 | 第26-28页 |
| 3. pcDNA3.1(+)—hBirA质粒的构建 | 第28-30页 |
| (二) RNA结合蛋白—PCBP2的核糖核蛋白复合体的分离与鉴定 | 第30-37页 |
| 1. pcDNA3.1(+)—BAP_2—PCBP2质粒的构建 | 第30-32页 |
| 2. 在293T细胞中hBirA、BAP_2—PCBP2真核表达载体的共转染及BAP2—PCBP2的融合表达蛋白生物素化的验证 | 第32页 |
| 3. 融合蛋白BAP_2—PCBP2的纯化 | 第32-33页 |
| 4. hBirA与BirA蛋白生物素化的效率比较 | 第33-34页 |
| 5. BAP_2—PCBP2结合mRNA特异性的RT—PCR验证 | 第34-37页 |
| 四 讨论 | 第37-40页 |
| 五 小结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 文献综述 | 第43-51页 |
| 英文名词及缩写 | 第51-52页 |
| 论文发表情况 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-62页 |
