| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 中文文摘 | 第6-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-42页 |
| ·多不饱和脂肪酸概况 | 第14-15页 |
| ·DHA的研究概况 | 第15-17页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的研究进展 | 第17-37页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶概况 | 第17页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的特征 | 第17-20页 |
| ·植物中的脂肪酸脱饱和酶 | 第20-27页 |
| ·可溶性的△~9-脂酰ACP脱饱和酶 | 第20-23页 |
| ·△~(12)-脂肪酸脱饱和酶 | 第23-24页 |
| ·△~(15)-脂肪酸脱饱和酶 | 第24-26页 |
| ·△~6-脂肪酸脱饱和酶 | 第26-27页 |
| ·动物中的脂肪酸脱饱和酶 | 第27-31页 |
| ·△~9-脂肪酸脱饱和酶 | 第27-28页 |
| ·△~(12)-与△~(15)-脂肪酸脱饱和酶 | 第28-29页 |
| ·△~6-脂肪酸脱饱和酶 | 第29页 |
| ·△~5-脂肪酸脱饱和酶 | 第29-30页 |
| ·双功能的△5／△6-脂肪酸脱饱和酶 | 第30-31页 |
| ·真菌和其他低等真核生物中的脂肪酸脱饱和酶 | 第31-37页 |
| ·△~9-脂肪酸脱饱和酶 | 第31页 |
| ·△~(12)-与△~(15)-脂肪酸脱饱和酶 | 第31-32页 |
| ·△~6-脂肪酸脱饱和酶 | 第32-34页 |
| ·△~5-脂肪酸脱饱和酶 | 第34-35页 |
| ·△~8-脂肪酸脱饱和酶 | 第35页 |
| ·双功能△~6-脂肪酸脱饱和酶／乙炔酶 | 第35-36页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶 | 第36-37页 |
| ·膜整合脂肪酸脱饱和酶的系统进化 | 第37-40页 |
| ·△~9-脂肪酸脱饱和酶单系群 | 第37-38页 |
| ·△~(12)-和△~(19)-脂肪酸脱饱和酶单系群 | 第38页 |
| ·“front-end”脂肪酸脱饱和酶单系群 | 第38-40页 |
| ·本研究的意义 | 第40-41页 |
| ·技术路线 | 第41-42页 |
| 第2章 Thraustochytrium sp.FJN-10脂肪酸组成及其18S rRNA基因序列分析 | 第42-54页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第43页 |
| ·Thraustochytrium sp.FJN-10种子培养基 | 第43页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第43页 |
| ·基因组DNA提取液 | 第43页 |
| ·其它试剂的配制 | 第43页 |
| ·松花粉垂钓法分离菌种 | 第43页 |
| ·Thraustochytrium sp.FJN-10的分类鉴定 | 第43-44页 |
| ·形态学观察 | 第43-44页 |
| ·分类鉴定 | 第44页 |
| ·脂肪酸组成的测定 | 第44页 |
| ·油脂的提取 | 第44页 |
| ·油脂甲酯化 | 第44页 |
| ·脂肪酸组成的测定 | 第44页 |
| ·18S rRNA基因序列分析 | 第44-48页 |
| ·总DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·DNA的浓度和质量测定 | 第45页 |
| ·PCR扩增 | 第45页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第45-46页 |
| ·连接与转化 | 第46-47页 |
| ·测序与序列分析 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-54页 |
| ·松花粉垂钓法分离菌种 | 第48页 |
| ·Thraustochytrium sp.FJN-10的分类鉴定 | 第48-49页 |
| ·海洋真菌FJN-10的形态学观察 | 第48-49页 |
| ·鉴定结果 | 第49页 |
| ·脂肪酸组成分析 | 第49页 |
| ·18S rRNA基因的序列分析 | 第49-54页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增 | 第51页 |
| ·18S rDNA的测序与序列分析 | 第51-54页 |
| 第3章 △~4-脂肪酸脱饱和酶基因的克隆及结构分析 | 第54-80页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·质粒 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-61页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第55页 |
| ·温度及时间对FJN-10合成DHA的影响研究 | 第55-56页 |
| ·摇瓶培养 | 第56页 |
| ·生物量的测定 | 第56页 |
| ·脂肪酸提取及其气相色谱分析 | 第56页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶基因的cDNA克隆及结构分析 | 第56-61页 |
| ·总RNA提取 | 第56-57页 |
| ·RNA完整性和均一性分析 | 第57页 |
| ·反转录 | 第57-58页 |
| ·引物合成和测序 | 第58页 |
| ·脱饱和酶基因部分cDNA序列的RT-PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第59页 |
| ·连接与转化 | 第59页 |
| ·测序与分析 | 第59页 |
| ·3’cDNA末端扩增(3’RACE) | 第59-60页 |
| ·5’cDNA末端扩增(5’RACE) | 第60-61页 |
| ·全长cDNA序列的扩增 | 第61页 |
| ·序列分析软件 | 第61页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶基因组结构的研究 | 第61页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第61页 |
| ·DNA的浓度和质量测定 | 第61页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶基因组DNA的扩增 | 第61页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的系统进化分析 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-73页 |
| ·温度及时间对FJN-10合成DHA的影响研究 | 第61-63页 |
| ·温度对FJN-10合成DHA的影响 | 第61-62页 |
| ·时间对FJN-10生长和DHA产生的影响 | 第62-63页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶基因的cDNA克隆及结构分析 | 第63-71页 |
| ·总RNA的提取和检测 | 第63-64页 |
| ·部分cDNA序列的RT-PCR扩增及其序列分析 | 第64-65页 |
| ·3’和5’cDNA末端序列的扩增及其序列分析 | 第65-68页 |
| ·全长cDNA序列扩增 | 第68页 |
| ·序列分析 | 第68-71页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶基因组结构的研究 | 第71-72页 |
| ·DNA的提取 | 第71页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的基因组序列的PCR扩增 | 第71-72页 |
| ·扩增产物的序列分析 | 第72页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶的系统进化分析 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-80页 |
| ·温度及时间对FJN-10合成DHA的影响 | 第73-75页 |
| ·温度对FJN-10合成DHA的影响 | 第73-74页 |
| ·时间对FJN-10合成DHA的影响 | 第74-75页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶基因的cDNA克隆及结构分析 | 第75-77页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶的基因组结构 | 第77页 |
| ·系统进化分析 | 第77-80页 |
| 第4章 △~4-脂肪酸脱饱和酶基因的功能表达 | 第80-90页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·菌株 | 第80页 |
| ·质粒 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80-81页 |
| ·主要仪器 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-84页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第81-82页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第81页 |
| ·酿酒酵母培养基 | 第81-82页 |
| ·酿酒酵母诱导培养基 | 第82页 |
| ·△~4-脂肪酸脱饱和酶基因的功能表达 | 第82-84页 |
| ·目的基因片断的扩增 | 第82页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第82-83页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备及转化 | 第83页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第83-84页 |
| ·脂肪酸的气相色谱分析 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-88页 |
| ·目的基因片断的扩增 | 第84页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第84-86页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第86-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| 总结与展望 | 第90-92页 |
| 总结 | 第90页 |
| 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 个人简历 | 第106-108页 |
| 建师范大学学位论文使用授权声明 | 第108页 |
