| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-18页 |
| 轮状病毒综述 | 第9-18页 |
| 一、轮状病毒概述 | 第9-10页 |
| 1.概述 | 第9页 |
| 2.病原学 | 第9-10页 |
| 二、轮状病毒主要表面抗原的生物学特性 | 第10-12页 |
| 1.抗原VP4 | 第10-12页 |
| 2.抗原VP6 | 第12页 |
| 3.抗原VP7 | 第12页 |
| 三、轮状病毒分子致病机理 | 第12-13页 |
| 四、RV感染的免疫机制 | 第13-15页 |
| 1.黏膜免疫保护机制 | 第13-14页 |
| 2.体液免疫 | 第14-15页 |
| 3.细胞免疫 | 第15页 |
| 五、RV疫苗研究现状 | 第15-18页 |
| 1.弱毒疫苗 | 第16页 |
| 2.DNA疫苗 | 第16-17页 |
| 3.亚单位疫苗 | 第17-18页 |
| 第二部分 实验内容 | 第18-57页 |
| 实验一 猪A组轮状病毒VP6基因克隆与测序 | 第18-30页 |
| 1.材料和方法 | 第18-23页 |
| ·病毒与菌株 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·培养基的制备 | 第18页 |
| ·溶液的配制 | 第18-19页 |
| ·引物的设计 | 第19页 |
| ·轮状病毒总RNA的提取 | 第19页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第19-20页 |
| ·VP6基因的克隆 | 第20-23页 |
| ·测序鉴定 | 第23页 |
| 2.结果 | 第23-28页 |
| ·轮状病毒总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增 | 第24页 |
| ·目的片断的回收纯化 | 第24页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第24-28页 |
| 3.讨论 | 第28-30页 |
| ·VP6基因的研究意义 | 第28-29页 |
| ·连接反应中量比关系和温度的选择 | 第29-30页 |
| 实验二、猪A组轮状病毒VP6基因的真核表达 | 第30-40页 |
| 1.材料与方法 | 第30-33页 |
| ·质粒与细胞 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·试剂的配制 | 第30-31页 |
| ·传代细胞及制备 | 第31页 |
| ·VP6基因真核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.结果 | 第33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.VP6基因在真核细胞中的表达 | 第33-40页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第33-35页 |
| ·质粒的定量与纯度的鉴定 | 第35页 |
| ·真核重组表达质粒转染MA-104细胞 | 第35页 |
| ·目的基因在MA-104细胞中表达的鉴定 | 第35-37页 |
| ·结果 | 第37-38页 |
| ·质粒的定量与纯度鉴定的结果 | 第37-38页 |
| ·荧光抗体检测结果 | 第38页 |
| ·RT-PCR鉴定结果 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·表达猪A组轮状病毒VP6蛋白的意义 | 第38-39页 |
| ·关于实验结果讨论 | 第39-40页 |
| 实验三、猪A组轮状病毒VP6基因的对比免疫检测 | 第40-57页 |
| 1.材料和方法 | 第40-42页 |
| ·主要药品和试剂 | 第40页 |
| ·质粒 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·实验动物免疫及血液样品采集 | 第40-41页 |
| ·抗体检测 | 第41-42页 |
| ·CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+、CD4~+／CD8~+细胞数量及比值的检测 | 第42页 |
| ·淋巴细胞转化实验 | 第42页 |
| 2.结果 | 第42-50页 |
| ·重组真核表达载体的OD值测定结果 | 第42-43页 |
| ·CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+细胞数量及CD4~+／CD8~+比值的检测结果 | 第43-49页 |
| ·淋巴细胞转化实验 | 第49页 |
| ·抗体检测结果 | 第49-50页 |
| 3.讨论 | 第50-57页 |
| ·猪轮状病毒DNA疫苗的作用机理 | 第50-51页 |
| ·联合免疫的意义 | 第51-52页 |
| ·流式检测结果讨论 | 第52-55页 |
| ·淋巴细胞转化实验结果讨论 | 第55-56页 |
| ·ELISA检测抗RV抗体结果讨论 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |