| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-28页 |
| 1 概述 | 第11-12页 |
| 2 草坪草遗传转化的主要方法 | 第12-17页 |
| 2．1 基因枪技术 | 第12-15页 |
| 2．1．1 基因枪技术的发展史 | 第12-13页 |
| 2．1．2 影响基因枪转化的几个因素 | 第13-15页 |
| 2．1．3 基因枪技术在草坪草转基因研究中的应用 | 第15页 |
| 2．2 原生质体介导的 DNA转化法 | 第15页 |
| 2．3 农杆菌介导的遗传转化法 | 第15-16页 |
| 2．4 碳化硅介导的DNA转移 | 第16-17页 |
| 3 报告基因和选择标记基因 | 第17-21页 |
| 3．1 报告基因检测技术 | 第17-19页 |
| 3．1．1 常用的几种报告基因 | 第17-18页 |
| 3．1．2 gus报告基因活性检测 | 第18-19页 |
| 3．2 选择标记基因 | 第19-21页 |
| 4 草坪草转基因研究进展 | 第21页 |
| 5 几丁质酶基因及其在植物遗传转化中的应用 | 第21-27页 |
| 5．1 几丁质酶的主要性质 | 第21-24页 |
| 5．1．1 植物几丁质酶的特性 | 第21-22页 |
| 5．1．2 微生物儿丁质酶的主要特性 | 第22-24页 |
| 5．2 几丁质酶基因的表达调控 | 第24-25页 |
| 5．2．1 植物几丁质酶基因的表达调控 | 第24-25页 |
| 5．2．2 微生物几丁质酶基因的表达调控 | 第25页 |
| 5．3 几丁质酶在抗真菌基因工程中的应用 | 第25-27页 |
| 5．3．1 几丁质酶在植物中的抗病作用 | 第25-26页 |
| 5．3．2 几丁质酶在植物抗真菌基因工程中的应用 | 第26-27页 |
| 6 本研究的背景、目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 高羊茅离体培养体系的建立 | 第28-33页 |
| 1 实验材料和方法 | 第28-29页 |
| 1．1 植物材料 | 第28页 |
| 1．2 实验仪器 | 第28页 |
| 1．3 实验方法 | 第28-29页 |
| 1．3．1 愈伤组织的诱导 | 第28页 |
| 1．3．2 愈伤组织的继代培养 | 第28页 |
| 1．3．3 愈伤组织的分化和再生植株的炼苗与移栽 | 第28-29页 |
| 1．3．4 数据统计 | 第29页 |
| 2 结果与讨论 | 第29-33页 |
| 2．1 不同浓度2，4-D对颂歌高羊茅愈伤组织诱导率的影响 | 第29-31页 |
| 2．2 高羊茅植株分化及不同浓度KT分化成苗的影响 | 第31-33页 |
| 第三章 pCAMBIA1301-RC24表达载体的构建 | 第33-44页 |
| 1 实验材料 | 第33页 |
| 1．1 菌株和质粒 | 第33页 |
| 1．2 培养基 | 第33页 |
| 1．3 主要的酶试剂 | 第33页 |
| 2 实验原理 | 第33-35页 |
| 3 实验方法 | 第35-40页 |
| 3．1 pCAMBIA1301-RC24的构建 | 第35-38页 |
| 3．1．1 质粒的提取和酶切 | 第35-36页 |
| 3．1．2 RC24基因片段的回收 | 第36-37页 |
| 3．1．3 去磷酸化处理、连接及转化试验 | 第37-38页 |
| 3．2 利用冻融法将pCAMBIA1301-RC24导入农杆菌LBA4404中 | 第38-40页 |
| 3．2．1 感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 3．2．2 冻融法转化农杆菌LBA4404感受态细胞 | 第38-39页 |
| 3．2．3 利用农杆菌转化法感染烟草叶片进行GUS瞬间表达分析 | 第39-40页 |
| 4 实验结果与分析 | 第40-44页 |
| 4．1 pCAMBIA1301-RC24的构建 | 第40-42页 |
| 4．2 gus基因在烟草叶片中的表达 | 第42-44页 |
| 第四章 利用基因枪法转化高羊茅胚性愈伤组织 | 第44-55页 |
| 1 质粒的构建、提取、检测及酶切分析 | 第44-46页 |
| 1．1 质粒的构建 | 第44页 |
| 1．2 质粒DNA的提取 | 第44-45页 |
| 1．3 质粒DNA的电泳检测和紫外分光光度法测定其含量 | 第45页 |
| 1．3．1 质粒DNA的电泳检测 | 第45页 |
| 1．3．2 紫外分光光度法测定DNA含量 | 第45页 |
| 1．4 质粒DNA的酶切分析 | 第45-46页 |
| 2 金粉的制备 | 第46页 |
| 3 微弹轰击 | 第46-47页 |
| 3．1 愈伤组织的预培养和渗透处理 | 第46页 |
| 3．2 微弹的制备 | 第46页 |
| 3．3 基因枪轰击 | 第46页 |
| 3．4 转化体的筛选培养和植株的再生 | 第46-47页 |
| 3．5 gus(β-葡糖醛酸糖苷酶)基因瞬间表达分析 | 第47页 |
| 4 转基因植株的分子鉴定 | 第47-48页 |
| 4．1 颂歌高羊茅基因组DNA的提取 | 第47-48页 |
| 4．2 再生植株的PCR检测 | 第48页 |
| 5 实验结果与讨论 | 第48-54页 |
| 5．1 质粒DNA的酶切分析 | 第48-50页 |
| 5．2 GUS(β-葡糖醛酸糖苷酶)基因瞬间表达分析 | 第50-51页 |
| 5．2．1 蔗糖处理时间对GUS瞬间表达效果和转化效率的影响 | 第50页 |
| 5．2．2 不同微弹用量和轰击次数对gus基因瞬间表达的影响 | 第50-51页 |
| 5．3 不同质粒DNA轰击后愈伤组织的分化成苗情况 | 第51-52页 |
| 5．4 转基因高羊茅植株的PCR检测 | 第52-54页 |
| 6 讨论 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 1 高羊茅离体培养体系的建立 | 第55页 |
| 2 pCAMBIA1301-RC24载体的构建 | 第55页 |
| 3 利用基因枪法将水稻几丁质酶基因导入高羊茅胚性愈伤组织 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 图版说明 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
