| 1 引言 | 第1-25页 |
| ·牧草组织培养研究进展 | 第10-13页 |
| ·植株再生体系的建立 | 第10-11页 |
| ·牧草组织培养技术的应用 | 第11-13页 |
| ·牧草基因工程研究进展 | 第13-21页 |
| ·建立遗传转化体系 | 第13-15页 |
| ·选择标记基因与启动子 | 第15-16页 |
| ·基因工程的遗传改良 | 第16-21页 |
| ·牧草转基因技术存在的问题 | 第21-22页 |
| ·高效组织培养再生体系的建立 | 第21页 |
| ·外源基因的高效表达 | 第21-22页 |
| ·转基因牧草向大田释放的风险性 | 第22页 |
| ·展望 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 以幼穗为外植体的冰草属植物组织培养再生体系的建立 | 第25-37页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·冰草材料 | 第25页 |
| ·外植体 | 第25页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第25-26页 |
| ·诱导分化和植株再生 | 第26-27页 |
| ·植株再生 | 第27页 |
| ·植株移栽 | 第27页 |
| ·评价指标 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第27-28页 |
| ·愈伤组织的分化 | 第28-29页 |
| ·幼穗大小对诱导愈伤组织和植株再生的影响 | 第29-32页 |
| ·4种冰草材料愈伤组织诱导和分化情况 | 第32-33页 |
| ·结论 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-37页 |
| ·培养基成分对再生植株的影响 | 第34页 |
| ·外源激素的作用 | 第34-35页 |
| ·幼穗取材时期 | 第35页 |
| ·基因型差异 | 第35-36页 |
| ·低温预处理的作用 | 第36-37页 |
| 3 冰草遗传转化体系的建立及转抗旱基因的研究 | 第37-60页 |
| ·材料与方法 | 第37-49页 |
| ·冰草属植物 | 第37页 |
| ·靶材料准备 | 第37页 |
| ·目的基因与重组质粒 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·构建共转化表达载体pHBP5CS | 第37-38页 |
| ·构建植物表达载体pBPI-P5CS | 第38-41页 |
| ·构建双元表达载体pSHKP5CS | 第41页 |
| ·重组质粒DNA的提取和纯化 | 第41-42页 |
| ·基因枪共转化 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的除草剂筛选 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第44-49页 |
| ·PCR扩增分析 | 第44-45页 |
| ·Southern检测 | 第45-48页 |
| ·RT-PCR扩增分析 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·共转化植物表达载体pHBP5CS的构建 | 第50页 |
| ·植物表达载体pBPI-P5CS的构建 | 第50-51页 |
| ·双元表达载体pSHK-P5CS的构建 | 第51页 |
| ·转基因植株的抗除草剂筛选 | 第51-53页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第53页 |
| ·转基因植株的Southern检测 | 第53页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的遗传转化率 | 第54-55页 |
| ·结论 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-60页 |
| ·冰草的遗传转化方法 | 第55-56页 |
| ·影响基因转化频率的因素 | 第56-57页 |
| ·共转化 | 第57-58页 |
| ·无载体主干序列的基因表达框的遗传转化 | 第58-59页 |
| ·外源基因在转基因植株后代中的遗传行为 | 第59-60页 |
| 4 拟南芥CBF4基因及其启动子序列的分离与启动子功能鉴定 | 第60-75页 |
| ·材料与方法 | 第62-67页 |
| ·拟南芥材料 | 第62-63页 |
| ·提取基因组DNA | 第63页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·PCR | 第63页 |
| ·扩增产物的克隆及序列分析 | 第63-64页 |
| ·表达载体构建 | 第64页 |
| ·表达载体质粒转化农杆菌 | 第64-66页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第66-67页 |
| ·组织化学法检测报告基因GUS的表达 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-73页 |
| ·序列分析 | 第67-72页 |
| ·拟南芥CBF4 基因序列及同源性分析 | 第68-69页 |
| ·拟南芥CBF4启动子DNA序列及同源性分析 | 第69-71页 |
| ·启动子功能预测分析 | 第71-72页 |
| ·双元表达载体构建 | 第72-73页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第73页 |
| ·GUS活性的组织染色分析 | 第73页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 附图 | 第85-92页 |
| 附图说明 | 第92-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |