| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| 1．1 GA的生物合成途径及部位 | 第9-16页 |
| 1．1．1 GA的生物合成位置 | 第9-10页 |
| 1．1．2 GA的生物合成途径 | 第10-16页 |
| 1．1．2．1 甲羟戊酸至GGPP途径 | 第10-11页 |
| 1．1．2．2 GGPP环化为内根-贝壳杉烯途径 | 第11-12页 |
| 1．1．2．3 内根-贝壳杉烯至GA_（12）-醛途径 | 第12-14页 |
| 1．1．2．4 GA12-醛途径 | 第14-16页 |
| 1．2 传导受阻引起的矮化 | 第16-18页 |
| 1．3 GA对花、果、种子发育的作用 | 第18-19页 |
| 1．4 GA与外界环境的关系 | 第19-20页 |
| 1．4．1 GA与光的关系 | 第19-20页 |
| 1．4．2 GA与温度的关系 | 第20页 |
| 1．5 GA促进细胞伸长的作用机理 | 第20-22页 |
| 1．6 小结 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-44页 |
| 2．1 实验材料 | 第23页 |
| 2．1．1 植物材料 | 第23页 |
| 2．1．2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2．1．3 酶及生化试剂 | 第23页 |
| 2．2 试验方法 | 第23-31页 |
| 2．2．1 总RNA的提取 | 第23-25页 |
| 2．2．2 反转录体系及程序 | 第25页 |
| 2．2．3 目的基因片段的获得 | 第25-29页 |
| 2．2．3．1 中间片段的获得 | 第25-29页 |
| 2．2．4 3’末端的获得 | 第29-31页 |
| 2．2．4．1 锚定引物B26反转录 | 第29页 |
| 2．2．4．2 3’RACE嵌套引物的合成 | 第29页 |
| 2．2．4．3 3’RACE嵌套PCR的体系和程序 | 第29-31页 |
| 2．3 5’RACE克隆方法 | 第31-33页 |
| 2．3．1 5’RACE所用引物 | 第31页 |
| 2．3．2 反转录和加尾反应 | 第31-32页 |
| 2．3．3 5’RACE PCR体系及程序 | 第32-33页 |
| 2．3．4 片断的回收 | 第33页 |
| 2．4 全长cDNA的获得 | 第33-34页 |
| 2．5 GA-20氧化酶的分离 | 第34-36页 |
| 2．5．1 20-氧化酶特异引物的合成 | 第34页 |
| 2．5．2 微量法提取平邑甜茶总DNA | 第34-35页 |
| 2．5．3 20氧化酶的PCR体系及程序 | 第35-36页 |
| 2．6 序列分析 | 第36页 |
| 2．6．1 同源性分析 | 第36页 |
| 2．6．2 二级结构及跨膜结构分析 | 第36页 |
| 2．7 Southern杂交 | 第36-38页 |
| 2．7．1 基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2．7．2 用于Southern杂交的DNA大量酶切 | 第37页 |
| 2．7．3 用碱性缓冲液在尼龙膜上进行Southern转膜 | 第37-38页 |
| 2．8 地高辛DNA标记及免疫学检测 | 第38-40页 |
| 2．8．1 地高辛标记探针 | 第38-39页 |
| 2．8．2 杂交 | 第39页 |
| 2．8．3 免疫学检测 | 第39页 |
| 2．8．4 染色反应 | 第39-40页 |
| 2．9 半定量PCR法检测ent-kaurene oxidase酶的表达方式 | 第40-43页 |
| 2．9．1 内参18S rRNA引物的合成 | 第40页 |
| 2．9．2 步骤 | 第40-43页 |
| 2．10 20-氧化酶的RT-PCR检测 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-72页 |
| 3．1 目的基因cDNA片段的分离 | 第44-59页 |
| 3．1．1 中间片段的分离 | 第44-49页 |
| 3．1．1．1 RNA提取 | 第44页 |
| 3．1．1．2 中间片段的RT-PCR | 第44-46页 |
| 3．1．1．3 平邑甜茶贝壳杉烯氧化酶的序列 | 第46-47页 |
| 3．1．1．4 丰香草莓的序列 | 第47-49页 |
| 3．1．2 3’端的克隆 | 第49-54页 |
| 3．1．2．1 碧桃贝壳杉烯氧化酶3’端的克隆 | 第49-50页 |
| 3．1．2．2 丰香草莓贝壳杉烯氧化酶3’端的克隆 | 第50-52页 |
| 3．1．2．3 贝壳杉烯氧化酶3’端的序列 | 第52-54页 |
| 3．1．3 5’端的克隆 | 第54-57页 |
| 3．1．3．1 RT-PCR | 第55-56页 |
| 3．1．3．2 5’端序列 | 第56-57页 |
| 3．1．4 全长基因的克隆 | 第57-59页 |
| 3．1．4．1 RT-PCR结果 | 第57页 |
| 3．1．4．2 全长序列 | 第57-59页 |
| 3．2 贝壳杉烯氧化酶的同源性分析 | 第59-60页 |
| 3．2．1 氨基酸序列的比较 | 第59页 |
| 3．2．2 同源性分析 | 第59-60页 |
| 3．2．2．1 聚类分析 | 第59-60页 |
| 3．2．2．2 序列同源矩阵 | 第60页 |
| 3．3 草莓贝壳杉烯氧化酶全长基因的二级结构分析 | 第60-61页 |
| 3．4 20氧化酶的克隆 | 第61-62页 |
| 3．5 半定量RT-PCR | 第62-67页 |
| 3．5．1 持家基因18SrRNA的定量分析 | 第62-63页 |
| 3．5．2 半定量RT-PCR模板起始量的确定 | 第63页 |
| 3．5．3 半定量RT-PCR检测苹果贝壳杉烯氧化酶的表达 | 第63-64页 |
| 3．5．4 半定量RT-PCR检测草莓和碧桃的贝壳杉烯氧化酶的表达 | 第64-67页 |
| 3．5．4．1 PCR循环数的确定 | 第64-65页 |
| 3．5．4．2 碧桃半定量RT-PCR | 第65-66页 |
| 3．5．4．3 贝壳杉烯氧化酶在草莓各个组织中的表达 | 第66-67页 |
| 3．6 20-氧化酶的RT-PCR检测 | 第67-68页 |
| 3．7 贝壳杉烯氧化酶基因拷贝数的确定 | 第68-72页 |
| 4 讨论 | 第72-81页 |
| 4．1 关于RACE实验方法 | 第72-74页 |
| 4．1．1 实验设计方面 | 第72-74页 |
| 4．1．2 药品的选择 | 第74页 |
| 4．2 关于地高辛标记和检测体系 | 第74-75页 |
| 4．3 半定量PCR的可靠性 | 第75-76页 |
| 4．4 3’非编码区对基因的调控 | 第76-77页 |
| 4．5 贝壳杉烯氧化酶是新类型的P450酶 | 第77-78页 |
| 4．6 贝壳杉烯氧化酶是一个多基因家族 | 第78页 |
| 4．7 果树特有的赤霉素合成方式 | 第78-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 英文摘要 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
