应用体内足迹法研究小鼠β-珠蛋白基因簇重要调控元件上的DNA-蛋白质间的相互作用
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 一、前言 | 第12-22页 |
| 二、材料与方法 | 第22-35页 |
| (一) 材料 | 第22-23页 |
| 1.细胞系 | 第22页 |
| 2.实验用小鼠 | 第22页 |
| 3.修饰酶 | 第22页 |
| 4.其它主要试剂 | 第22页 |
| 5.放射性核素 | 第22页 |
| 6.主要仪器设备 | 第22-23页 |
| (二) 实验方法 | 第23-35页 |
| 1.实验程序 | 第23-24页 |
| 2.细胞培养,复苏及诱导 | 第24页 |
| ·细胞复苏与培养 | 第24页 |
| ·细胞冻存 | 第24页 |
| ·细胞诱导 | 第24页 |
| ·细胞悬液的制备 | 第24页 |
| 3.小鼠的发育调控研究 | 第24-25页 |
| ·小鼠的选择及处理 | 第24页 |
| ·胎肝及骨髓有核红细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·细胞悬液的制备 | 第24-25页 |
| ·骨髓中成红细胞的分离 | 第24-25页 |
| ·胎肝中成红细胞的分离 | 第25页 |
| ·Percoll梯度离心分离有核红细胞 | 第25页 |
| ·梯度溶液制备 | 第25页 |
| ·细胞分离 | 第25页 |
| 4.药物扰动研究 | 第25-27页 |
| ·给药 | 第25页 |
| ·血常规检查 | 第25-26页 |
| ·溶血液的制备 | 第26页 |
| ·珠蛋白链比的确定 | 第26-27页 |
| ·Triton-Urea凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·灌胶 | 第26页 |
| ·电泳 | 第26-27页 |
| ·染色与脱色 | 第27页 |
| ·扫描定量 | 第27页 |
| ·骨髓有核红细胞的分离 | 第27页 |
| 5.细胞的体内甲基化 | 第27页 |
| 6.基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·细胞裂解 | 第27-28页 |
| ·制备DNA | 第28页 |
| 7.对照DNA的体外甲基化处理 | 第28-29页 |
| 8.化学法裂解 | 第29页 |
| 9.连接介导的PCR | 第29-32页 |
| ·第一链合成及Linker的连接 | 第29-30页 |
| ·PCR | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| 10.标记引物掺入PCR产物 | 第32-33页 |
| ·P3引物的标记 | 第32页 |
| ·PCR产物的标记 | 第32-33页 |
| 11.聚丙烯酰胺凝胶测序电泳 | 第33-34页 |
| ·灌胶 | 第33页 |
| ·电泳 | 第33-34页 |
| ·放射自显影 | 第34页 |
| 12.磷屏扫描与结果处理 | 第34-35页 |
| 三、实验结果 | 第35-55页 |
| (一) MEL细胞诱导前后研究结果 | 第35-43页 |
| 1.HS2上的体内足迹结果 | 第35-40页 |
| 2.启动子上的体内足迹结果 | 第40-43页 |
| (二) 小鼠的发育调控研究结果 | 第43-48页 |
| 1.HS2上的体内足迹结果 | 第43-45页 |
| 2.启动子上的体内足迹结果 | 第45-48页 |
| (三) 药物扰动研究结果 | 第48-55页 |
| 1.血液学指标的变化 | 第48-49页 |
| 2.珠蛋白链比的变化 | 第49页 |
| 3.HS2上的体内足迹结果 | 第49-52页 |
| 4.启动子上的体内足迹结果 | 第52-55页 |
| 四、讨论 | 第55-63页 |
| 五、小结 | 第63-64页 |
| 六、参考文献 | 第64-72页 |
| 七、综述 | 第72-80页 |
| (一) β-蛋白基因簇表达调控的反式作用因子 | 第72-76页 |
| (二) 连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用 | 第76-80页 |
| 八、英文名词及缩写 | 第80-81页 |
| 九、致谢 | 第81页 |
