| 致谢 | 第1-4页 |
| 第一部分 嗜热α-葡萄糖苷酶的克隆表达，纯化及特性研究(Part I: Cloning and Expression of thermophilic a-glucosidase in E.Coli, and its purification and characterization) | 第4-68页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·引言 | 第13-14页 |
| ·嗜热菌概述 | 第14-15页 |
| ·α-葡萄糖苷酶概述 | 第15-18页 |
| ·α-葡萄糖苷酶理化性质 | 第15页 |
| ·α-葡萄糖苷酶来源 | 第15页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的结构和活性中心 | 第15-16页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的催化特性 | 第16页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的生物学功能为 | 第16-18页 |
| ·α-葡萄糖苷酶抑制剂 | 第18-19页 |
| ·α-葡萄糖苷酶抑制剂用途 | 第18页 |
| ·α-葡萄糖苷酶抑制剂原理 | 第18页 |
| ·α-葡萄糖苷酶抑制剂种类 | 第18-19页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的克隆与表达 | 第19-22页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19-22页 |
| ·α-葡萄糖苷酶活力测定 | 第22-23页 |
| ·转苷比酶活测定 | 第22页 |
| ·直接滴定法 | 第22页 |
| ·PNPG法 | 第22-23页 |
| ·嗜热性α-葡萄糖苷酶 | 第23-25页 |
| ·嗜热性α-葡萄糖苷酶的来源 | 第23-25页 |
| ·嗜热性α-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第25页 |
| ·论文思路及主要内容 | 第25-27页 |
| 第二章 嗜热α-葡萄糖苷酶基因克隆及原核表达系统的构建 | 第27-39页 |
| ·引言 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第29页 |
| ·菌种和载体 | 第29-30页 |
| ·培养基及抗生素 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·Thermus thermophilus HB27基因组提取 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·PCR扩增嗜热性α-葡萄糖苷酶基因 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳及片段回收 | 第32页 |
| ·质粒pET28a(+)提取 | 第32-33页 |
| ·限制性内切酶双酶切 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| ·转化和筛选 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-38页 |
| ·Thermus thermophilus HB27基因组提取 | 第35页 |
| ·嗜热性α-葡萄糖苷酶基因PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞制备 | 第36页 |
| ·载体质粒pET28a(+)双酶切 | 第36-37页 |
| ·PCR产物连接,转化和酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 重组嗜热α-葡萄糖苷酶的表达,纯化及酶活测定 | 第39-51页 |
| ·引言 | 第39-41页 |
| ·重组嗜热α-葡萄糖苷酶的表达 | 第39-40页 |
| ·重组嗜热α-葡萄糖苷酶的纯化 | 第40页 |
| ·重组嗜热α-葡萄糖苷酶的酶活性测定 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第41页 |
| ·菌种和质粒 | 第41页 |
| ·培养基,抗生素和诱导剂 | 第41-42页 |
| ·试验方法 | 第42-45页 |
| ·质粒提取和转化 | 第42页 |
| ·样品预处理 | 第42页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-44页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第44页 |
| ·TTAG酶活测定 | 第44-45页 |
| ·TTAG的纯化 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·感受态细胞制备 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)转化检验 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE | 第46-47页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第47页 |
| ·TTAG活力测定 | 第47-48页 |
| ·TTAG的纯化 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 嗜热α-葡萄糖苷酶最适反应条件和特征参数研究 | 第51-61页 |
| ·前言 | 第51-53页 |
| ·嗜热α-葡萄糖苷酶最适反应条件 | 第51页 |
| ·嗜热α-葡萄糖苷酶酶促反应动力学 | 第51-53页 |
| ·本章实验内容 | 第53页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·常用仪器 | 第53页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第53-55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·TTAG的最适pH值测定 | 第55页 |
| ·TTAG最适温度测定 | 第55页 |
| ·两因素正交法测定TTAG最适反应条件 | 第55页 |
| ·TTAG热稳定性 | 第55-56页 |
| ·酶促反应动力学参数测定与计算 | 第56页 |
| ·结果和讨论 | 第56-59页 |
| ·TTAG最适pH值测定 | 第56页 |
| ·TTAG最适温度测定 | 第56-57页 |
| ·两因素正交法测定TTAG最适反应条件 | 第57-58页 |
| ·TTAG的热稳定性 | 第58页 |
| ·酶促反应动力学参数测定与计算 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 第二部分 抗菌肽的稳定性研究(Part II: Research on the stability of Drosomycin) | 第68-104页 |
| 摘要 | 第71-72页 |
| Abstract | 第72-73页 |
| 第一章 文献综述 | 第73-83页 |
| ·抗菌肽简介 | 第73-76页 |
| ·抗菌肽种类 | 第73页 |
| ·抗菌肽的作用机制 | 第73-74页 |
| ·抗菌肽的生物学作用 | 第74-75页 |
| ·抗菌肽的应用 | 第75-76页 |
| ·drosomycin(DRS)简介 | 第76-78页 |
| ·drosomycin序列及结构 | 第77-78页 |
| ·蛋白质折叠 | 第78-80页 |
| ·蛋白质折叠简介 | 第78页 |
| ·蛋白质折叠与去折叠 | 第78-80页 |
| ·蛋白质折叠研究方法 | 第80页 |
| ·荧光光谱 | 第80-81页 |
| ·圆二色谱 | 第81-82页 |
| ·本文内容 | 第82-83页 |
| 第二章 Drosomycin的纯化 | 第83-90页 |
| ·前言 | 第83-84页 |
| ·实验 | 第84-87页 |
| ·仪器 | 第84页 |
| ·试剂 | 第84-85页 |
| ·方法 | 第85-87页 |
| ·结果和讨论 | 第87-89页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第87-88页 |
| ·Drosomycin的纯化 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第三章 Drosomycin稳定性与去,复折叠 | 第90-99页 |
| ·前言 | 第90页 |
| ·仪器 | 第90页 |
| ·试剂 | 第90-92页 |
| ·方法 | 第92-93页 |
| ·荧光光谱检测 | 第92页 |
| ·圆二色谱检测 | 第92页 |
| ·pH介导的去,复折叠 | 第92页 |
| ·可逆的变性剂介导的去折叠 | 第92页 |
| ·温度介导的去折叠 | 第92-93页 |
| ·结果与讨论 | 第93-97页 |
| ·native DRS的光谱分析 | 第93-94页 |
| ·pH介导的去,复折叠 | 第94-95页 |
| ·可逆的变性剂介导的去折叠 | 第95-96页 |
| ·温度介导的去折叠 | 第96-97页 |
| ·极端环境稳定性比较 | 第97页 |
| ·结论 | 第97-99页 |
| 第四章 结论与展望 | 第99-100页 |
| ·结论 | 第99页 |
| ·展望 | 第99-100页 |
| 相关文献 | 第100-104页 |
| 个人简历 | 第104页 |
