| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 第一部分：文献综述 毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的应用 | 第8-14页 |
| 1 宿主菌株 | 第8-9页 |
| 2 表达载体 | 第9-10页 |
| 3 表达载体的整合与毕赤酵母 | 第10页 |
| 4 影响外源蛋白在毕赤酵母中高效表达的因素 | 第10-11页 |
| 5 分泌型外源蛋白的修饰 | 第11-12页 |
| 6 巴斯德毕赤酵母表达系统的应用 | 第12页 |
| 参考文献 | 第12-14页 |
| 第二部分：实验及结果 | 第14-61页 |
| 第一章 pPIC9K-Bkafp972 表达载体的构建及电转化巴斯德毕赤酵母 | 第14-28页 |
| 1 材料与方法 | 第15-21页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·实验方法 | 第16-21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-26页 |
| ·重组质粒pGEX4T-1-Bkafp972 酶切鉴定 | 第21页 |
| ·pPIC9K 载体双酶切 | 第21-22页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-Bkafp972 酶切鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-Bkafp972 测序报告 | 第23-24页 |
| ·pPIC9K-Bkafp972 电转化毕赤酵母及 His~+阳性转化子的筛选 | 第24-25页 |
| ·G418 抗性筛选 His~+高拷贝转化子 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-28页 |
| 第二章 GS115-pPIC9K-Bkafp972 重组子的筛选与表达 | 第28-39页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-37页 |
| ·重组子表型PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·发酵上清液Tricine SDS-PAGE 电泳检测 | 第36页 |
| ·Western blotting 分析 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-39页 |
| 第三章 BkAFP972 酵母重组蛋白生物活性研究 | 第39-47页 |
| 1 材料与方法 | 第40-42页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·重组蛋白粗提物在低温条件下对细菌的保护 | 第42-44页 |
| ·重组蛋白对冰晶的修饰作用 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-47页 |
| 第四章 BkAFP972 原核表达产物对小鼠肝脏的低温保护 | 第47-61页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| ·菌种及质粒 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第49页 |
| ·多克隆抗体的制备及Western bloting 检测 | 第49页 |
| ·热滞活性的测量 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白静脉注射及组织学试验 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-55页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·Western blotting 检测 | 第51-52页 |
| ·热滞活性的测量 | 第52-53页 |
| ·组织学实验 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 第三部分：总结 | 第61-63页 |
| 结论 | 第61页 |
| 存在的问题与展望 | 第61-62页 |
| 论文创新点 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录1 个人简历 | 第64-65页 |
| 附录2 培养基配方 | 第65-70页 |
| 附录3 常用仪器设备 | 第70-72页 |
