嗜热酯酶底物选择性机制研究
| 提要 | 第1-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-16页 |
| 1. 脂肪酶简介 | 第7-10页 |
| 2. 酯酶与脂肪酶的差别 | 第10-11页 |
| 3. 嗜热酯酶AFEST | 第11-12页 |
| 4. 利用酶的“非专一性”开辟新的酶源 | 第12-14页 |
| 5. 立题依据 | 第14-16页 |
| 第二章 实验材料 | 第16-21页 |
| 1. 菌种 | 第16页 |
| 2. 质粒 | 第16-17页 |
| 3. 主要试剂 | 第17-18页 |
| 4. 主要仪器 | 第18-19页 |
| 5. 培养基 | 第19页 |
| 6. 溶液配制 | 第19-20页 |
| 7. 常备储备液 | 第20页 |
| 8. 软件 | 第20-21页 |
| 第三章 定点突变——可塑性位点的确定 | 第21-36页 |
| 第一节 引言 | 第21页 |
| 第二节 实验方法 | 第21-29页 |
| 1. AFEST基因的克隆 | 第21-24页 |
| 2. 定点突变体R33A和N44A的构建 | 第24-25页 |
| 3. 阳性克隆的DNA序列测定 | 第25页 |
| 4. AFEST野生型与突变体的表达、纯化 | 第25-26页 |
| 5. AFEST野生型及突变体酶学性质的测定 | 第26-29页 |
| 第三节 实验结果 | 第29-35页 |
| 1. 可塑性位点的确定 | 第29-32页 |
| 2. 定点突变体R33A和N44A的构建 | 第32页 |
| 3. AFEST野生型与突变体的纯化 | 第32-33页 |
| 4. 野生型和突变体脂肪酶活力的比较 | 第33-34页 |
| 5. 野生型和突变体酯酶活力的比较 | 第34-35页 |
| 第四节 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 特定位点饱和突变库的构建与筛选 | 第36-57页 |
| 第一节 引言 | 第36页 |
| 第二节 实验方法 | 第36-43页 |
| 1. 定点饱和突变库的构建 | 第36-39页 |
| 2. 饱和突变库的筛选 | 第39页 |
| 3. 阳性突变体的分离纯化 | 第39-40页 |
| 4. 突变体酶学性质的测定 | 第40-43页 |
| 第三节 实验结果 | 第43-55页 |
| 1. 饱和突变库的构建 | 第43-44页 |
| 2. 饱和突变库的筛选及阳性突变体的确定 | 第44页 |
| 3. 底物选择性的测定 | 第44-47页 |
| 4. 温度对野生型和突变体催化活力的影响 | 第47-49页 |
| 5. 圆二色谱实验 | 第49-52页 |
| 6. 蛋白质结构柔性分析 | 第52-53页 |
| 7. 分子动力学模拟和酶与底物的对接 | 第53-55页 |
| 第四节 小结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 摘要 | 第63-66页 |
| Abstract | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
