| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 溶菌酶的研究进展 | 第10-22页 |
| 1 溶菌酶的作用机理、应用及分子生物学研究 | 第11-18页 |
| ·溶菌酶的催化机制 | 第11-13页 |
| ·溶菌酶的应用 | 第13-15页 |
| ·溶菌酶在食品工业中的应用 | 第13页 |
| ·溶菌酶作为添加剂的应用 | 第13页 |
| ·溶菌酶营养、保健功能方面的应用 | 第13页 |
| ·溶菌酶在酶工程上的应用 | 第13-14页 |
| ·溶菌酶在医药方面的应用 | 第14-15页 |
| ·溶菌酶在农业上的应用 | 第15页 |
| ·溶菌酶的分子生物学研究 | 第15-18页 |
| 2 N,0-Z-乙酰胞壁质酶的性质研究 | 第18-20页 |
| ·N,0-二乙酰胞壁质酶的生化性质 | 第18-19页 |
| ·N,0-二乙酰胞壁质酶的分子生物学 | 第19-20页 |
| 3 本课题立题依据及前景分析 | 第20-22页 |
| 第二章 产溶菌酶菌株的筛选及16S RDNA的鉴定 | 第22-30页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌株、质粒及遗传特性 | 第22-23页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-26页 |
| ·土样的采集及处理 | 第23页 |
| ·产溶菌酶菌株的筛选 | 第23-24页 |
| ·菌体基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·PCR克隆基因组16S rDNA与序列分析 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增基因组16S rDNA | 第25页 |
| ·连接反应 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·转化反应 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的筛选,鉴定及测序 | 第26页 |
| 3 结果与讨论 | 第26-29页 |
| ·土样的选择 | 第26页 |
| ·筛选得到的结果 | 第26-27页 |
| ·提取基因组DNA的实验结果 | 第27-28页 |
| ·PCR的电泳试验结果 | 第28-29页 |
| 4 本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 溶菌酶保守区的克隆 | 第30-39页 |
| 1 实验材料 | 第30页 |
| ·菌株、质粒及来源 | 第30页 |
| ·工具酶及试剂 | 第30页 |
| 2 CODEHOP PCR技术克隆溶菌酶基因的部分序列 | 第30-32页 |
| ·用于克隆放线菌溶菌酶基因保守区序列的CODEHOP引物设计 | 第30-31页 |
| ·CODEHOP PCR扩增部分溶菌酶基因序列 | 第31-32页 |
| ·CODEHOP PCR反应条件 | 第31页 |
| ·CODEHOP PCR反应程序 | 第31-32页 |
| ·CODEHOP PCR产物TA克隆、序列测定及筛选 | 第32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-38页 |
| ·CODEHOP PCR设计引物注意的问题 | 第32-33页 |
| ·CODEHOP PCR试验结果 | 第33-36页 |
| ·溶菌酶基因保守区核苷酸序列的在线比对及相互比对结果 | 第36-38页 |
| 4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 全长溶菌酶基因的克隆及序列分析 | 第39-51页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·菌体与载体 | 第39页 |
| ·工具酶和试剂 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-43页 |
| ·TAIL-PCR扩增溶菌酶基因保守区段的上下游序列 | 第39-41页 |
| ·用于TAIL-PCR的AD引物序列 | 第39-40页 |
| ·用于TAIL-PCR的上下游的特异性引物 | 第40-41页 |
| ·TAIL-PCR巢式引物的设计 | 第41-42页 |
| ·TAIL-PCR的反应体系和反应条件 | 第42-43页 |
| ·TAIL-PCR产物的回收及序列分析 | 第43页 |
| 3 试验结果及讨论 | 第43-50页 |
| ·TAIL-PCR AD引物的设计 | 第43页 |
| ·TAIL-PCR反应注意的问题 | 第43-44页 |
| ·TAIL-PCR产物的特点 | 第44-47页 |
| ·溶菌酶基因全序列的拼接和分析 | 第47-50页 |
| ·拼接序列 | 第47页 |
| ·克隆得到的溶菌酶基因与其编码的蛋白质分析 | 第47-50页 |
| 4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第五章 溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达及重组溶菌酶活性鉴定 | 第51-57页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·菌株与载体 | 第51页 |
| ·培养基、工具酶及试剂 | 第51页 |
| 2 PCR扩增某一株菌溶菌酶基因的成熟肽部分 | 第51-53页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒转化E.coli BL21(DE3)pLysS及筛选 | 第52-53页 |
| ·重组溶菌酶的酶学性质分析 | 第53页 |
| 3 结果与讨论 | 第53-56页 |
| ·基因克隆至pET-26b(+)载体 | 第53页 |
| ·溶菌酶基因克隆至pET-26b(+)载体 | 第53-56页 |
| ·重组溶菌酶的酶学性质分析 | 第56页 |
| 4 小结 | 第56-57页 |
| 下一步的工作计划 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-70页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第70页 |
