| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-37页 |
| 1 脂肪酶简介 | 第13-17页 |
| ·脂肪酶的结构与催化机理 | 第13-15页 |
| ·微生物脂肪酶的水解特异性 | 第15-17页 |
| ·位置特异性 | 第15-16页 |
| ·脂肪酸特异性 | 第16页 |
| ·立体特异性 | 第16-17页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第17页 |
| 2 微生物脂肪酶的生产 | 第17-23页 |
| ·产脂肪酶微生物的分离 | 第20-21页 |
| ·脂肪酶的发酵生产 | 第21-23页 |
| ·碳源影响 | 第21-22页 |
| ·氮源影响 | 第22页 |
| ·金属离子的影响 | 第22-23页 |
| ·pH 对产酶的影响 | 第23页 |
| 3 脂肪酶的分离纯化及性质研究 | 第23-26页 |
| ·假丝酵母脂肪酶 | 第25页 |
| ·地丝菌脂肪酶 | 第25-26页 |
| ·丝孢酵母脂肪酶 | 第26页 |
| 4 微生物脂肪酶分子生物学的研究 | 第26-31页 |
| ·脂肪酶基因的克隆方法 | 第26-29页 |
| ·基因组文库和cDNA 文库的构建和基因的筛选 | 第27页 |
| ·简并引物克隆和其它扩增方法结合克隆基因 | 第27-29页 |
| ·细菌脂肪酶 | 第29-30页 |
| ·真菌脂肪酶 | 第30-31页 |
| 5 微生物脂肪酶的应用 | 第31-35页 |
| ·脂肪水解 | 第32页 |
| ·皮革生产 | 第32页 |
| ·纸浆和造纸 | 第32页 |
| ·加酶洗涤剂 | 第32-33页 |
| ·食品成分 | 第33页 |
| ·医学应用 | 第33页 |
| ·合成手性化合物 | 第33-34页 |
| ·油脂改性 | 第34-35页 |
| ·药物和化妆品 | 第35页 |
| 6 本论文的研究目的与意义 | 第35-36页 |
| 7 本论文研究和讨论的主要内容 | 第36-37页 |
| 第二章 A. PULLULANS HN2-3 脂肪酶生产条件的优化 | 第37-48页 |
| 1 引言 | 第37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-40页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·培养基与试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·脂肪酶酶活测定方法 | 第38页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第38-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-47页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第40-41页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第41-43页 |
| ·不同金属离子对产酶的影响 | 第43页 |
| ·不同初始PH 及培养温度对产酶的影响 | 第43-44页 |
| ·橄榄油添加时间对产酶的影响 | 第44-47页 |
| 4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 A. PULLULANS HN2-3 脂肪酶的分离纯化及性质研究 | 第48-65页 |
| 1 引言 | 第48-49页 |
| 2 材料和方法 | 第49-56页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·培养基和试剂 | 第49-50页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·脂肪酶的分离纯化 | 第50-54页 |
| ·脂肪酶的性质研究 | 第54-56页 |
| 3 结果与讨论 | 第56-64页 |
| ·脂肪酶的分离纯化 | 第56-59页 |
| ·Sephradex~(TM) G-75 凝胶过滤 | 第56页 |
| ·DEAE-Sephorose Fast Flow 阴离子交换层析柱纯化 | 第56-57页 |
| ·蛋白酶纯化过程参数和不连续SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第57-59页 |
| ·纯化脂肪酶的性质研究 | 第59-64页 |
| ·纯化脂肪酶的最适作用温度及热稳定性 | 第59页 |
| ·纯化脂肪酶的最适作用pH 及pH 稳定性 | 第59-60页 |
| ·金属离子对纯化酶活性的影响 | 第60-61页 |
| ·蛋白抑制剂对纯化酶活性的影响 | 第61-62页 |
| ·酶的动力学常数 | 第62-63页 |
| ·纯化酶对油脂的水解实验 | 第63-64页 |
| 4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 A. PULLULANS HN2-3 脂肪酶基因的克隆 | 第65-89页 |
| 1 引言 | 第65页 |
| 2 材料和方法 | 第65-73页 |
| ·菌株与质粒 | 第65页 |
| ·培养基和试剂 | 第65-67页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-73页 |
| ·A. pullulans HN2-3 基因组DNA 的提取 | 第67页 |
| ·A. pullulans HN2-3 总RNA 的提取及第一条cDNA 链的合成 | 第67-68页 |
| ·脂肪酶部分cDNA 基因的克隆 | 第68-71页 |
| ·RACE | 第71页 |
| ·从基因组DNA 扩增脂肪酶的基因 | 第71-72页 |
| ·脂肪酶生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 3 结果和讨论 | 第73-88页 |
| ·脂肪酶部分CDNA 基因的克隆 | 第73-77页 |
| ·简并引物的设计 | 第73-76页 |
| ·简并引物PCR 克隆脂肪酶部分cDNA 序列 | 第76-77页 |
| ·RACE | 第77-82页 |
| ·3’RACE PCR | 第77-79页 |
| ·5’RACE PCR | 第79-80页 |
| ·ORF 框的获得 | 第80-82页 |
| ·从基因组DNA 扩增脂肪酶基因 | 第82-83页 |
| ·A. PULLULANS HN2-3 脂肪酶基因LIP1 序列分析 | 第83-84页 |
| ·A. PULLULANS HN2-3 脂肪酶推导氨基酸序列（LIP1）分析 | 第84-88页 |
| 4 本章小结 | 第88-89页 |
| 第五章 A. PULLULANS HN2-3 脂肪酶基因CDNALIP1 在大肠杆菌中的表达 | 第89-103页 |
| 1 引言 | 第89页 |
| 2 材料和方法 | 第89-96页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·质粒和菌株 | 第89-90页 |
| ·培养基和试剂 | 第90-91页 |
| ·培养基 | 第90页 |
| ·试剂 | 第90-91页 |
| ·方法 | 第91-96页 |
| ·pET-24a(+)LIP1 表达载体的构建 | 第91-93页 |
| ·pET-24a(+)LIP1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第93-95页 |
| ·重组脂肪酶的性质 | 第95-96页 |
| 3 结果与讨论 | 第96-102页 |
| ·PET-24A(+)LIP1 表达载体的构建 | 第96-98页 |
| ·PET-24A(+)LIP1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第98-99页 |
| ·重组脂肪酶的性质 | 第99-102页 |
| ·温度对重组脂肪酶活性的影响 | 第99-100页 |
| ·pH 对重组脂肪酶活性的影响 | 第100-101页 |
| ·重组脂肪酶水解油脂实验 | 第101-102页 |
| 4 本章小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-116页 |
| 总结与创新点 | 第116-117页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
