| 内容提要 | 第1-5页 |
| 英文缩略词 | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-35页 |
| ·肿瘤诱导分化治疗 | 第11-23页 |
| ·诱导分化疗法的提出、发展及意义 | 第11-12页 |
| ·诱导分化剂 | 第12-17页 |
| ·诱导分化剂作用机制 | 第17-19页 |
| ·肝癌细胞诱导分化研究进展 | 第19-21页 |
| ·诱导分化疗法在临床中的应用 | 第21-23页 |
| ·OSM | 第23-34页 |
| ·OSM基因与蛋白质结构 | 第23-24页 |
| ·OSM受体与信号传导通路 | 第24-27页 |
| ·OSM生物学功能研究进展 | 第27-33页 |
| ·OSM临床应用前景 | 第33-34页 |
| ·立题依据 | 第34-35页 |
| 第2章 rhOSM毕赤酵母高效分泌表达体系的建立 | 第35-50页 |
| ·材料与方法 | 第35-43页 |
| ·器材及设备 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·质粒和菌株 | 第36页 |
| ·转化毕赤酵母菌 | 第36-37页 |
| ·阳性菌株的筛选 | 第37-38页 |
| ·表达产物rhOSM分析 | 第38-40页 |
| ·AKTA explorer多功能纯化系统小量纯化rhOSM | 第40-41页 |
| ·rhOSM质谱分析 | 第41页 |
| ·rhOSM氨基酸序列分析 | 第41-43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·rhOSM毕赤酵母工程菌的筛选 | 第43-45页 |
| ·rhOSM小量纯化 | 第45页 |
| ·质谱测定rhOSM相对分子质量 | 第45页 |
| ·rhOSM的N-端氨基酸序列分析 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第3章 rhOSM中试规模发酵及纯化工艺研究 | 第50-68页 |
| ·材料与方法 | 第50-58页 |
| ·器材及设备 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·细胞株 | 第51页 |
| ·溶液配制 | 第51-53页 |
| ·毕赤酵母表达rhOSM的pH值优化 | 第53页 |
| ·毕赤酵母中试规模表达rhOSM条件的优化 | 第53-55页 |
| ·rhOSM大规模纯化系统的建立 | 第55-57页 |
| ·Bradford法定量rhOSM | 第57页 |
| ·MTT比色法测定rhOSM活性 | 第57页 |
| ·结果处理及统计学分析 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-65页 |
| ·毕赤酵母表达rhOSM pH值的优化 | 第58页 |
| ·rhOSM中试规模发酵条件优化 | 第58-62页 |
| ·rhOSM大规模纯化 | 第62-63页 |
| ·rhOSM活性测定 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 第4章 rhOSM体外诱导肝癌细胞分化的实验研究 | 第68-95页 |
| ·材料与方法 | 第68-77页 |
| ·主要仪器和器材 | 第68-69页 |
| ·主要试剂 | 第69-70页 |
| ·细胞株 | 第70页 |
| ·液体配制 | 第70页 |
| ·SMMC-7721 细胞的复苏、传代及冻存 | 第70-71页 |
| ·RT-PCR法鉴定OSMR及OSM在SMMC-7721 细胞中的表达 | 第71-72页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞增殖抑制作用的检测 | 第72-73页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞周期及凋亡率的影响 | 第73页 |
| ·免疫荧光细胞化学法检测信号传导分子STAT3 的活化 | 第73-74页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞形态与超微结构的影响 | 第74-75页 |
| ·免疫细胞化学染色法检测细胞内AFP表达水平 | 第75页 |
| ·rhOSM诱导SMMC-7721 细胞分化相关生化指标的检测 | 第75-76页 |
| ·结果处理及统计学分析 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-90页 |
| ·SMMC-7721 细胞中OSMR及OSM表达的鉴定 | 第77页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞生长作用的影响 | 第77-80页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞周期及凋亡率的影响 | 第80-82页 |
| ·免疫荧光细胞化学法检测STAT3 磷酸化 | 第82页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞形态与超微结构的影响 | 第82-85页 |
| ·rhOSM对SMMC-7721 细胞AFP表达水平的影响 | 第85-87页 |
| ·rhOSM诱导SMMC-7721 细胞分化相关生化指标的影响 | 第87-90页 |
| ·讨论 | 第90-95页 |
| 第5章 rhOSM体内诱导肝癌细胞分化的实验研究 | 第95-108页 |
| ·材料与方法 | 第95-98页 |
| ·器材及设备材料 | 第95页 |
| ·主要试剂 | 第95页 |
| ·细胞株 | 第95-96页 |
| ·实验动物 | 第96页 |
| ·试剂配制 | 第96页 |
| ·接种细胞的制备 | 第96页 |
| ·小鼠肝癌模型的建立、动物分组及给药 | 第96页 |
| ·肿瘤生长情况测定及抑瘤率的计算 | 第96-97页 |
| ·荷瘤鼠外周血AFP水平检测 | 第97页 |
| ·荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数、肝脏指数的测定 | 第97页 |
| ·肿瘤组织光镜观察 | 第97页 |
| ·结果处理及统计学分析 | 第97-98页 |
| ·结果 | 第98-105页 |
| ·rhOSM在体内对小鼠肝癌细胞H22 皮下移植瘤生长的影响 | 第98-99页 |
| ·rhOSM对荷瘤鼠外周血AFP的影响 | 第99-101页 |
| ·rhOSM对荷瘤鼠胸腺指数、脾指数及肝脏指数的影响 | 第101-103页 |
| ·rhOSM对小鼠肝癌细胞H22 皮下移植瘤组织形态学影响 | 第103-105页 |
| ·讨论 | 第105-108页 |
| 研究总结与创新点 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-117页 |
| 附录 rhOSM N-端 15 个氨基酸残基序列色谱图 | 第117-119页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文及获奖情况 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 中文摘要 | 第121-125页 |
| Abstract | 第125-129页 |
