| 中文摘要 | 第4-9页 |
| abstract | 第9-13页 |
| 前言 | 第17-23页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第一部分 HIF-2α 和VM在胰腺癌中的表达及临床意义 | 第23-40页 |
| 材料 | 第24-25页 |
| 一、病例资料 | 第24页 |
| 二、主要试剂 | 第24页 |
| 三、主要仪器 | 第24页 |
| 四、主要溶液的配置 | 第24-25页 |
| 方法 | 第25-27页 |
| 一、免疫组化法（IHC）检测组织中HIF-2α、VM和VE-cadherin的表达 | 第25-26页 |
| 二、统计学处理 | 第26-27页 |
| 结果 | 第27-34页 |
| 一．免疫组化（IHC）检测胰腺组织中HIF-2α 的表达 | 第27页 |
| 二．胰腺癌组织中HIF-2α 胰腺癌临床病理因素的关系 | 第27-28页 |
| 三．PAS/CD34双染法检测胰腺组织中VM的表达 | 第28-29页 |
| 四．胰腺癌组织中VM表达与胰腺癌临床病理因素的关系 | 第29-30页 |
| 五．胰腺癌组织中HIF-2α 与VM表达的关系 | 第30-31页 |
| 六．胰腺癌组织中HIF-2α 和VM表达与胰腺癌患者预后的关系 | 第31-34页 |
| 讨论 | 第34-37页 |
| 结论 | 第37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 第二部分 HIF-2α 促进胰腺癌细胞血管拟态形成的作用和机制研究 | 第40-76页 |
| 材料 | 第41-42页 |
| 一、细胞株及实验试剂 | 第41-42页 |
| 二、实验仪器 | 第42页 |
| 方法 | 第42-56页 |
| 一、HIF-2α-RNAi慢病毒载体的构建 | 第42-44页 |
| 二、HIF-2α-过表达慢病毒载体的构建 | 第44-46页 |
| 三、阳性克隆质粒的扩增与提取 | 第46-47页 |
| 四、细胞的复苏、培养、传代及冻存备份 | 第47-48页 |
| 五、慢病毒转染胰腺癌AsPC-1 和SW1990细胞 | 第48-49页 |
| 六、三维培养（血管形成实验） | 第49-50页 |
| 七、蛋白免疫印迹法（Western blot） | 第50-51页 |
| 八、细胞侵袭实验（Cell invasion assay） | 第51-52页 |
| 九、细胞划痕实验检测细胞迁移能力（Wound healing assay） | 第52页 |
| 十、染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第52-54页 |
| 十一、荧光素酶基因检测报告（Luciferase assay） | 第54-55页 |
| 十二、统计处理 | 第55-56页 |
| 结果 | 第56-68页 |
| RNAi 载体和 HIF-2α-RNAi 重组质粒结果 | 第56-58页 |
| 一、Age I和EcoR I进行酶切RNAi载体后琼脂糖凝胶电泳图谱 | 第56页 |
| 二、GV115/HIF-2α-RNAi重组质粒的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 三、GV115/HIF-2α-RNAi重组质粒的测序鉴定 | 第57-58页 |
| 过表达载体和 HIF-2α 重组质粒结果 | 第58-61页 |
| 四、Age I进行酶切过表达载体后琼脂糖凝胶电泳图谱 | 第58-59页 |
| 五、目的基因HIF-2α 片段的获取 | 第59-60页 |
| 六、GV358-3FLAG/HIF-2α 重组质粒的PCR鉴定 | 第60页 |
| 七、GV358-3FLAG/HIF-2α 重组质粒的测序鉴定 | 第60-61页 |
| 慢病毒包装及效率验证结果 | 第61-62页 |
| 八、慢病毒滴度测定 | 第61页 |
| 九、重组质粒的PCR内源靶筛 | 第61-62页 |
| HIF-2α 在胰腺癌细胞中的功能实验和机制 | 第62-68页 |
| 十、HIF-2α 在胰腺癌细胞株中的表达水平和靶向调控HIF-2α 的效率 | 第62-63页 |
| 十一、HIF-2α 对胰腺癌细胞侵袭、迁移能力和VM形成的影响 | 第63-66页 |
| 十二、HIF-2α 通过Twist结合到VE-cadherin的启动子区域促进胰腺癌VM的发生 | 第66-68页 |
| 讨论 | 第68-72页 |
| 结论 | 第72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 第三部分 HIF-2α 促进胰腺癌血管拟态形成的体内研究 | 第76-90页 |
| 材料 | 第77-78页 |
| 一、细胞株及实验试剂 | 第77页 |
| 二、实验仪器 | 第77-78页 |
| 方法 | 第78-81页 |
| 一、胰腺癌细胞的培养、传代 | 第78页 |
| 二、人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立 | 第78-79页 |
| 三、人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型的建立和干预 | 第79-80页 |
| 四、统计学处理 | 第80-81页 |
| 结果 | 第81-84页 |
| 一、裸鼠胰腺癌皮下种植瘤和原位种植瘤建模成功及鉴定 | 第81-83页 |
| 二、在裸鼠原位瘤中HIF-2α 对VM形成的影响 | 第83-84页 |
| 三、在裸鼠种植瘤中HIF-2α 对VM相关蛋白的作用 | 第84页 |
| 讨论 | 第84-87页 |
| 结论 | 第87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 综述 | 第90-108页 |
| 参考文献 | 第99-108页 |
| 全文缩略词 | 第108-110页 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
