| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 一 文献综述 | 第18-43页 |
| ·植物雄性不育概况 | 第18-23页 |
| ·植物雄性不育的来源 | 第18-20页 |
| ·天然不育源 | 第18-19页 |
| ·杂交后代中分离 | 第19页 |
| ·人工诱变 | 第19-20页 |
| ·基因工程 | 第20页 |
| ·植物雄性不育类型 | 第20-23页 |
| ·细胞质雄性不育 | 第20-21页 |
| ·细胞核雄性不育 | 第21-22页 |
| ·核质互作雄性不育 | 第22-23页 |
| ·植物花粉的发育过程 | 第23-26页 |
| ·植物花粉的发育过程 | 第23-24页 |
| ·花药绒毡层与花粉发育 | 第24-26页 |
| ·植物雄性不育突变体研究 | 第26-30页 |
| ·雄性不育突变的主要时期 | 第26页 |
| ·影响雄性器官的突变体 | 第26-27页 |
| ·影响花粉发育的突变 | 第27-28页 |
| ·减数分裂之前和减数分裂时期突变体 | 第27-28页 |
| ·减数分裂后的突变 | 第28页 |
| ·花粉释放突变体 | 第28-29页 |
| ·花粉功能突变体 | 第29页 |
| ·影响雄性育性的配子体突变体 | 第29-30页 |
| ·植物花粉发育相关基因的研究进展 | 第30-34页 |
| ·与花粉发育起始相关的基因 | 第30-31页 |
| ·与减数分裂相关的基因 | 第31-32页 |
| ·减数分裂前期I相关的基因 | 第31页 |
| ·减数分裂同源重组相关的基因 | 第31-32页 |
| ·减数分裂后期I相关的基因 | 第32页 |
| ·胞质分裂相关的基因 | 第32-33页 |
| ·四分体中表达的基因 | 第33页 |
| ·绒毡层中表达的基因 | 第33-34页 |
| ·与花粉有丝分裂I相关的基因 | 第34页 |
| ·生殖细胞有丝分裂相关基因 | 第34页 |
| ·亚麻雄性不育研究进展 | 第34-35页 |
| ·亚麻概述 | 第34-35页 |
| ·亚麻雄性不育的研究进展 | 第35页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第35-39页 |
| ·mRNA差异显示的优点 | 第36页 |
| ·mRNA差异显示技术在实际应用中存在的问题 | 第36-37页 |
| ·mRNA差异显示技术的改进 | 第37-38页 |
| ·mRNA差异显示技术在植物雄性不育研究中的应用 | 第38-39页 |
| ·RNA干涉技术 | 第39-43页 |
| ·RNA干涉现象的发现 | 第39页 |
| ·RNAi作用机制 | 第39-40页 |
| ·RNAi的特征 | 第40-41页 |
| ·RNAi的应用 | 第41-43页 |
| ·在植物改良中的应用 | 第41-42页 |
| ·细胞信号传导途径的研究 | 第42页 |
| ·基因治疗 | 第42-43页 |
| 二 亚麻雄性不育相关基因MS2-F的克隆和表达分析 | 第43-62页 |
| ·材料与方法 | 第44-52页 |
| ·植物材料及主要试剂 | 第44页 |
| ·简并引物的设计 | 第44-45页 |
| ·亚麻基因组DNA和亚麻花蕾总RNA的提取 | 第45-46页 |
| ·基因保守序列的获得及测序 | 第46-48页 |
| ·RT-PCR | 第46-47页 |
| ·RT-PCR产物的克隆及测序 | 第47-48页 |
| ·基因cDNA 3'、5'末端的克隆 | 第48-49页 |
| ·基因cDNA 3'末端的克隆 | 第48页 |
| ·基因cDNA 5'末端的克隆 | 第48-49页 |
| ·利用基因特异引物扩增基因cDNA和gDNA | 第49页 |
| ·基因序列分析 | 第49-50页 |
| ·基因的Northern杂交表达分析 | 第50-52页 |
| ·RNA甲醛变性凝胶电泳及转膜 | 第50-51页 |
| ·探针制备及标记 | 第51页 |
| ·杂交和免疫检测 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-60页 |
| ·基因保守序列片段的获得 | 第52-53页 |
| ·基因全长序列的获得 | 第53-54页 |
| ·基因序列分析 | 第54-59页 |
| ·亚麻MS2-F基因在不同组织中的表达分析 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 三 MS2-F基因的RNAi表达载体构建及遗传转化 | 第62-75页 |
| ·材料与方法 | 第63-69页 |
| ·植物材料与主要试剂 | 第63-64页 |
| ·RNAi载体构建策略图 | 第64-65页 |
| ·亚麻花蕾总RNA的提取和反转录 | 第65页 |
| ·172片段的克隆及测序 | 第65页 |
| ·172片段的反向片段和正向片段的制备 | 第65-66页 |
| ·基因片段172“hpRNA”表达盒的组建 | 第66页 |
| ·基因片段172“hpRNA”表达盒的酶切鉴定 | 第66-67页 |
| ·RNAi表达载体构建及鉴定 | 第67页 |
| ·944片段的RNAi表达载体构建及鉴定 | 第67-68页 |
| ·冻融法转化农杆菌 LBA4404 | 第68页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第68页 |
| ·亚麻遗传转化 | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-74页 |
| ·MS2-F基因正向片段和反向片段的获得 | 第69-70页 |
| ·RNAi表达载体的酶切鉴定 | 第70页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第70-71页 |
| ·亚麻遗传转化结果 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| 四 显性核不育亚麻可育、不育花蕾mRNA差异表达研究 | 第75-98页 |
| ·材料及方法 | 第76-81页 |
| ·植物材料及主要试剂 | 第76-77页 |
| ·花蕾总RNA的提取 | 第77页 |
| ·反转录及PCR | 第77-78页 |
| ·PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染 | 第78-79页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第78页 |
| ·银染 | 第78-79页 |
| ·差异片段的回收及二次扩增 | 第79页 |
| ·差异片段的回收 | 第79页 |
| ·差异片段的二次PCR扩增 | 第79页 |
| ·反向Northern杂交验证 | 第79-80页 |
| ·探针的制备及标记 | 第79-80页 |
| ·点膜 | 第80页 |
| ·杂交及免疫检测 | 第80页 |
| ·阳性 cDNA差异片段的克隆及序列分析 | 第80页 |
| ·阳性 cDNA差异片段的克隆 | 第80页 |
| ·序列分析 | 第80页 |
| ·差异片段的Northern表达分析 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-94页 |
| ·总RNA质量的检测结果 | 第81-83页 |
| ·差异片段回收后的二次PCR扩增 | 第83页 |
| ·反向Northern杂交验证 | 第83-84页 |
| ·阳性差异片段的克隆与检测 | 第84-85页 |
| ·阳性差异片段的测序结果 | 第85-87页 |
| ·序列同源性分析 | 第87-93页 |
| ·差异片段G-E07-100的分析结果 | 第87-88页 |
| ·差异片段G-E07-330的分析结果 | 第88-89页 |
| ·差异片段G-E07-830的分析结果 | 第89-91页 |
| ·差异片段G-S273-500的分析结果 | 第91-92页 |
| ·差异片段A-S267-300的分析结果 | 第92页 |
| ·差异片段G-S274-250和G-S274-450的分析结果 | 第92-93页 |
| ·差异片段的Northern表达分析 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-98页 |
| ·花蕾总RNA质量检测 | 第94页 |
| ·mRNA显示技术缺点及其克服 | 第94-95页 |
| ·差异片段序列分析讨论 | 第95-96页 |
| ·绒毡层与雄性不育 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 博士期间发表的论文 | 第117页 |
