| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-44页 |
| ·通过基因工程手段提高抗生素产量 | 第14-32页 |
| ·井冈霉素生物合成研究进展 | 第32-40页 |
| ·井冈霉素发酵过程研究 | 第40-44页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第44-60页 |
| ·研究中所用菌株 | 第44-46页 |
| ·研究中所用质粒 | 第46-47页 |
| ·培养基和化学试剂 | 第47-49页 |
| ·通用实验方法 | 第49-53页 |
| ·超量表达系统所需质粒的构建 | 第53-55页 |
| ·REAL-TIME RT-PCR 测定基因转录水平 | 第55页 |
| ·检测超量表达后酶活力水平的变化 | 第55-56页 |
| ·UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因的克隆 | 第56-57页 |
| ·使用Q-TOF 检测UDP-葡萄糖 | 第57页 |
| ·卡那霉素抗性基因替换糖基转移酶基因的质粒构建 | 第57-58页 |
| ·携带转座子的质粒的构建 | 第58页 |
| ·体外海藻糖水解酶反应体系的建立 | 第58-60页 |
| 第三章 超量表达UDP-葡萄糖焦磷酸酶提高有效氧胺向井冈霉素的转化 | 第60-102页 |
| ·前言 | 第60-64页 |
| ·井冈霉素的在发酵过程中化学结构稳定 | 第64-65页 |
| ·井冈霉素不能被菌体所合成的Β-糖苷酶水解 | 第65-68页 |
| ·井冈霉素产生菌中用于超量表达基因的系统的构建 | 第68-69页 |
| ·糖基转移酶自身的活力不足不是有效氧胺积累的原因 | 第69-73页 |
| ·糖基转移酶不能催化井冈霉素糖基化的逆反应 | 第73-74页 |
| ·添加UDP-葡萄糖会显著地影响糖基化过程 | 第74-78页 |
| ·UDP-葡萄糖合成途径的分析及酶活测定 | 第78-83页 |
| ·UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因的克隆和体外功能的验证 | 第83-86页 |
| ·UDP-葡萄糖焦磷酸酶在井冈霉素高产菌株中的超量表达 | 第86-89页 |
| ·使用Q-TOF 检测菌体中UDP-葡萄糖的变化 | 第89-92页 |
| ·超量表达UDP-葡萄糖焦磷酸酶对井冈霉素产量的影响 | 第92-95页 |
| ·阻断菌体中UDP-葡萄糖消耗途径对井冈霉素与有效氧胺之间比例的影响 | 第95-99页 |
| ·本章讨论 | 第99-102页 |
| 第四章 井冈霉素产生菌中基于全基因组转座子突变的高通量筛选方法 | 第102-140页 |
| ·前言 | 第102-103页 |
| ·高效的突变系统的构建 | 第103-118页 |
| ·高通量的链霉菌培养和发酵系统的建立 | 第118-121页 |
| ·高通量的检测有效氧胺高产菌株的方法的建立 | 第121-127页 |
| ·突变株中转座插入位点的定位及其随机性分析 | 第127-128页 |
| ·使用高通量的培养和检测方法筛选有效氧胺突变菌株 | 第128-130页 |
| ·显著影响有效氧胺产量的突变株的确定 | 第130-133页 |
| ·显著影响有效氧胺产量的突变株的分析 | 第133-136页 |
| ·对于2 株高产突变株的回补实验 | 第136-138页 |
| ·本章讨论 | 第138-140页 |
| 第五章 全文总结 | 第140-143页 |
| ·超量表达UDP-葡萄糖焦磷酸酶提高有效氧胺向井冈霉素的转化部分研究工作总结 | 第140-141页 |
| ·井冈霉素产生菌中基于全基因组转座子突变的高通量筛选方法部分研究工作总结 | 第141-142页 |
| ·研究展望 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第156-158页 |
