| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 缩略语中英文对照 | 第17-19页 |
| 引言 | 第19-23页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第一部分 文献综述 | 第23-73页 |
| 第一章 哺乳动物体细胞核移植研究进展 | 第23-47页 |
| 1 哺乳动物体细胞核移植技术的发展 | 第23-24页 |
| 2 哺乳动物体细胞核移植的基本技术环节 | 第24-33页 |
| ·供体细胞的选择 | 第25-28页 |
| ·核受体胞质的准备 | 第28-30页 |
| ·供体细胞和受体细胞的重组 | 第30-31页 |
| ·重构胚的激活 | 第31-32页 |
| ·重构胚的培养 | 第32-33页 |
| 3 哺乳动物体细胞核移植有关机理研究进展 | 第33-40页 |
| ·受体细胞和供体细胞的核质互作 | 第33-35页 |
| ·体细胞供体核的表观重编程 | 第35-40页 |
| 4 体细胞核移植技术存在的问题与应用前景 | 第40-41页 |
| ·体细胞细胞核移植技术存在的问题 | 第40页 |
| ·应用前景 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 第二章 转基因动物乳腺生物反应器生产重组药用蛋白的研究进展 | 第47-73页 |
| 1 转基因动物制药的诞生 | 第47-49页 |
| ·细菌基因工程药物阶段 | 第47-48页 |
| ·细胞基因工程药物阶段 | 第48页 |
| ·转基因动物制药阶段 | 第48-49页 |
| 2 动物乳腺生物反应器的研究简史 | 第49-50页 |
| 3 乳腺生物反应器的分类 | 第50-51页 |
| ·啮齿动物乳腺生物反应器 | 第50-51页 |
| ·反刍动物乳腺生物反应器 | 第51页 |
| 4 乳腺生物反应器表达载体构建的研究 | 第51-56页 |
| ·与乳腺组织特异性表达有关的调控元件 | 第51-53页 |
| ·基于普通质粒的表达载体 | 第53-54页 |
| ·基于人工染色体的表达载体 | 第54-55页 |
| ·基于基因打靶的表达载体 | 第55-56页 |
| 5 乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展 | 第56-62页 |
| ·原核期胚胎的显微注射法 | 第56-58页 |
| ·转座子介导法 | 第58页 |
| ·逆转录病毒介导法 | 第58-59页 |
| ·精子载体法 | 第59页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第59-60页 |
| ·原始生殖细胞介导法 | 第60页 |
| ·转基因克隆动物法 | 第60-61页 |
| ·体细胞基因打靶制备乳腺生物反应器 | 第61-62页 |
| ·诱导多能干细胞基因打靶制备乳腺生物反应器 | 第62页 |
| 6 乳腺生物反应器的鉴定 | 第62-64页 |
| ·DNA水平的检测 | 第63页 |
| ·RNA水平的检测 | 第63页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第63-64页 |
| 7 转基因乳腺生物反应器存在的问题 | 第64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 第二部分 试验研究 | 第73-159页 |
| 第三章 人溶酶体β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在COS7细胞中的表达研究 | 第73-87页 |
| 1 材料与方法 | 第74-79页 |
| ·试验材料 | 第74-75页 |
| ·试验方法 | 第75-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| ·人胎盘组织总RNA的完整性 | 第79页 |
| ·GlcCerase cDNA的扩增 | 第79-80页 |
| ·GlcCerase序列分析结果 | 第80-81页 |
| ·pEGFP-GlcCerase重组质粒的构建与鉴定 | 第81-82页 |
| ·荧光显微镜观察COS7细胞中GFP基因的表达 | 第82页 |
| ·转染COS7细胞中GlcCerase基因的mRNA表达 | 第82页 |
| ·转染COS7细胞中GlcCerase基因的蛋白表达 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第四章 人GleCerase基因乳腺表达载体的构建及其在乳腺上皮细胞中的表达研究 | 第87-103页 |
| 1 材料与方法 | 第88-93页 |
| ·试验材料 | 第88-89页 |
| ·试验方法 | 第89-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-97页 |
| ·乳腺特异性表达载体的鉴定 | 第93-95页 |
| ·HC-11细胞的转染与鉴定 | 第95-96页 |
| ·GlcCerase基因在转基因HC-11细胞中的诱导表达 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-100页 |
| ·乳腺特异表达载体的构建 | 第97-98页 |
| ·乳腺特异表达载体的验证手段 | 第98-99页 |
| ·乳腺上皮细胞合成乳蛋白的可能机制 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 第五章 奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及脂质体法转染研究 | 第103-115页 |
| 1 材料与方法 | 第104-106页 |
| ·试验材料 | 第104页 |
| ·试验方法 | 第104-106页 |
| 2 结果与分析 | 第106-111页 |
| ·奶山羊胎儿成纤维细胞的一般形态观察 | 第106-107页 |
| ·胎儿细胞性别鉴定 | 第107-108页 |
| ·胎儿细胞生长曲线分析 | 第108页 |
| ·胎儿细胞核型分析 | 第108-109页 |
| ·胎儿细胞转染效率的优化 | 第109-111页 |
| 3 讨论 | 第111-113页 |
| ·供体细胞的原代培养与生物学特性分析 | 第111-112页 |
| ·脂质体转染体细胞效率的优化 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 第六章 转人GlcCerase基因奶山羊胎儿成纤维细胞的建立 | 第115-127页 |
| 1 材料与方法 | 第116-119页 |
| ·试验材料 | 第116-117页 |
| ·试验方法 | 第117-119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-122页 |
| ·细胞抗性试验 | 第119页 |
| ·外源基因转染山羊胎儿成纤维细胞 | 第119-120页 |
| ·稳定转染细胞的PCR鉴定 | 第120-121页 |
| ·转基因细胞的生长曲线 | 第121页 |
| ·转基因细胞的核型分析 | 第121-122页 |
| 3 讨论 | 第122-124页 |
| ·转基因阳性细胞克隆的分离 | 第122页 |
| ·转基因阳性细胞的筛选 | 第122-123页 |
| ·转基因供体细胞的染色体倍性 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 第七章 转人GlcCerase基因奶山羊克隆胚的构建及胚胎移植 | 第127-143页 |
| 1 材料与方法 | 第128-132页 |
| ·试验材料 | 第128-129页 |
| ·试验方法 | 第129-132页 |
| 2 结果与分析 | 第132-135页 |
| ·山羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第132-133页 |
| ·山羊转基因体细胞的核移植 | 第133-134页 |
| ·转基因体细胞克隆胚的体外培养与发育 | 第134-135页 |
| ·转基因体细胞克隆胚的PCR检测 | 第135页 |
| ·山羊转基因克隆胚的胚胎移植 | 第135页 |
| 3 讨论 | 第135-138页 |
| ·转染和筛选对转基因克隆胚胎发育的影响 | 第135-136页 |
| ·技术操作过程对核移植效率的影响 | 第136-137页 |
| ·重构胚胎培养体系 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-143页 |
| 第八章 外源基因转染对奶山羊供体细胞生物学特性的影响 | 第143-159页 |
| 1 材料与方法 | 第144-148页 |
| ·试验材料 | 第144-145页 |
| ·试验方法 | 第145-148页 |
| 2 结果 | 第148-153页 |
| ·培养细胞的形态与生长曲线 | 第148-149页 |
| ·稳定转染细胞的PCR鉴定 | 第149-150页 |
| ·外源基因转染对细胞周期分布的影响 | 第150页 |
| ·外源基因转染对细胞凋亡的影响 | 第150-151页 |
| ·外源基因转染对细胞基因表达的影响 | 第151-153页 |
| 3 讨论 | 第153-155页 |
| ·外源基因转染对奶羊体细胞周期分布和细胞凋亡的影响 | 第153-154页 |
| ·外源基因转染对奶羊体细胞基因相对表达水平的影响 | 第154-155页 |
| 参考文献 | 第155-159页 |
| 全文结论 | 第159-161页 |
| 创新点 | 第161页 |
| 进一步研究的内容 | 第161-163页 |
| 附录 | 第163-165页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第165-167页 |
| 致谢 | 第167页 |
