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花粉管介导hrpNEcc基因转化大白菜的研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1 引言第11-26页
   ·研究的目的与意义第11页
   ·文献综述第11-24页
     ·过敏性反应致病性基因及其应用第11-14页
     ·花粉管通道导入法第14-19页
     ·白菜基因工程研究进展第19-24页
   ·研究内容第24-25页
   ·技术路线第25-26页
2 材料与方法第26-39页
   ·hrpN_(Ecc)基因的克隆与植物表达载体的构建第26-32页
     ·实验材料第26-27页
     ·实验方法第27-32页
   ·花粉管通道法转化大白菜第32-34页
     ·实验材料第32-33页
     ·实验方法第33-34页
   ·花序渗透法转化第34-35页
     ·实验材料第34页
     ·实验方法第34-35页
   ·抗性苗的筛选第35页
     ·除草剂浓度的确定第35页
     ·转化株的筛选第35页
   ·抗性株的分子生物学鉴定第35-39页
     ·用SDS法提取白菜基因组DNA第35-36页
     ·PCR鉴定第36-37页
     ·PCR-Southern杂交鉴定第37-39页
3 结果与分析第39-51页
   ·hrpN_(Ecc)基因的克隆与植物表达载体的构建第39-46页
     ·胡萝卜软腐欧文氏菌基因组DNA的提取第39-40页
     ·hrpN_(Ecc)基因的扩增第40页
     ·hrpN_(Ecc)基因与克隆载体PMD19-T simple vector的连接第40-41页
     ·目的基因序列的测定和验证第41-42页
     ·植物表达载体的构建第42-45页
     ·重组子转化农杆菌的验证第45-46页
   ·花粉管通道法和花序渗透法介导hrpN_(Ecc)基因转入白菜第46-51页
     ·种子收获第46页
     ·Basta筛选浓度的确定第46页
     ·抗性植株的筛选第46-47页
     ·转基因植株的分子检测第47-51页
4 讨论第51-55页
   ·目的基因的选择第51页
   ·花粉管通道法转化白菜的方法第51-53页
     ·外源DNA对转化效果的影响第51-52页
     ·外源DNA导入方式的选择第52页
     ·外源DNA导入时间的选择及其对转化率的影响第52-53页
     ·假阳性率较高的原因分析第53页
     ·与其它花粉管通道法的转化率的比较第53页
   ·本实验的创新点第53页
   ·今后研究方向与展望第53-55页
5 结论第55-56页
致谢第56-57页
参考文献第57-65页
图版第65-69页
附录第69-70页
攻读硕士学位期间发表学术论文第70页

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