| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第13页 |
| ·供试培养基 | 第13页 |
| ·主要试剂及药品配制 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·玉米大斑病菌钙调磷酸酶CnA 基因RNAi 载体的构建 | 第14-20页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第14-15页 |
| ·载体构建策略 | 第15页 |
| ·CnA 基因插入片段的扩增 | 第15-16页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第16-17页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆 | 第17页 |
| ·转化感受态细胞及测序 | 第17-18页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第18-19页 |
| ·基因片段（A-Z 和A-F）与pSilent-1 载体质粒的重组 | 第19-20页 |
| ·CnB 基因沉默表达载体的构建 | 第20页 |
| ·CaN 基因RNAi 重组载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第20-23页 |
| ·转化子验证及分析 | 第21-22页 |
| ·探针制备 | 第22页 |
| ·酶切 | 第22页 |
| ·电转移 | 第22页 |
| ·Southern Blotting | 第22-23页 |
| ·免疫检测 | 第23页 |
| ·半定量RT-PCR 分析 | 第23-25页 |
| ·总RNA 的提取 | 第23页 |
| ·RNA 质量的检测 | 第23-24页 |
| ·总 RNA 的纯化 | 第24页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第24页 |
| ·RNAi 沉默转化子在不同基因的表达水平分析 | 第24-25页 |
| ·半定量RT-PCR 的反应条件 | 第25页 |
| ·玉米大斑病菌CnA 和CnB 基因RNAi 突变体分析 | 第25-28页 |
| ·菌落特征 | 第25页 |
| ·菌丝形态的显微观察 | 第25页 |
| ·生长速度的测定 | 第25-26页 |
| ·菌株产孢量的测定 | 第26页 |
| ·突变菌株致病力测定 | 第26页 |
| ·突变菌株HT-毒素活性 | 第26-27页 |
| ·HT-粗毒素的生物测定 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-40页 |
| ·CnA 基因沉默载体的构建 | 第28-30页 |
| ·CnA 基因片段的克隆 | 第28页 |
| ·将同源片段与pMD19-T Simple Vector 及验证 | 第28-30页 |
| ·CnB 基因沉默载体的构建 | 第30-31页 |
| ·CnB 基因片段的克隆 | 第30页 |
| ·将同源片段与pMD19-T Simple Vector 及验证 | 第30-31页 |
| ·CnA 和CnB 基因沉默突变体的获得 | 第31-34页 |
| ·原生质体转化和转化子筛选 | 第31-32页 |
| ·沉默突变体的获得与PCR 验证 | 第32页 |
| ·以hph 基因片段为探针对转化子进行 Southern blot 验证 | 第32-34页 |
| ·突变体和野生型菌株中CAM、STK1、STK2、PKA 基因的表达分析 | 第34-36页 |
| ·大斑病菌野生型和突变体RNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·CAM、STK1、STK2、PKA 基因的表达分析 | 第35-36页 |
| ·CaN 基因的沉默突变体性状初步分析 | 第36-40页 |
| ·菌落特征 | 第36页 |
| ·WT 与突变体菌丝形态的显微观察 | 第36-37页 |
| ·突变菌株与野生型的生长速度的测定 | 第37页 |
| ·菌株的产孢量 | 第37-38页 |
| ·突变菌株粗毒素生物学活性的测定 | 第38-39页 |
| ·突变菌株的致病力检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第48-49页 |
| 作者简历 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
