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拟南芥抗灰霉病相关基因AtBRG1的功能研究

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
1 引言第11-14页
2 材料和方法第14-32页
   ·供试拟南芥、载体及菌株第14页
   ·供试培养基、营养液和转化介质的配制第14-15页
   ·供试试剂第15-16页
   ·主要仪器第16页
   ·拟南芥的种植第16页
   ·拟南芥基因组DNA、总RNA 的提取及CDNA 的合成第16-18页
     ·拟南芥基因组DNA 提取第16-17页
     ·拟南芥总RNA 的提取及cDNA 的合成第17-18页
   ·BRG1 基因的原核表达及其对灰葡萄孢的作用第18-23页
     ·BRG1 基因的克隆第18-20页
     ·表达载体的构建第20-21页
     ·目的蛋白的表达第21-22页
     ·表达蛋白的Western Blotting 分析第22页
     ·pET-28a(+)/BRG1 融合蛋白的抑菌实验第22-23页
   ·BRG1 突变体的鉴定及BRG1 基因的功能分析第23-27页
     ·brg1 突变体的鉴定第23-26页
     ·brg1 突变体的抗病性测定第26页
     ·brg1 突变体的非生物胁迫试验第26页
     ·brg1 突变体的RT-PCR 分析第26-27页
   ·BRG1 基因的互补回复和超表达试验第27-32页
     ·BRG1 基因表达载体的构建第28-29页
     ·农杆菌的转化第29-30页
     ·拟南芥的遗传转化第30页
     ·转基因阳性苗的筛选第30页
     ·转基因植株的PCR 鉴定第30-31页
     ·转基因植株的RT-PCR 鉴定第31页
     ·转基因株系的表型验证第31-32页
3 结果与分析第32-44页
   ·BRG1 基因的原核表达及其对灰葡萄孢的作用第32-35页
     ·BRG1 基因的PCR 扩增第32页
     ·pMD19/BRG1 和pET28a(+)双酶切的结果第32-33页
     ·重组质粒的PCR 检测第33页
     ·目的蛋白的表达第33-34页
     ·BRG1 基因对灰葡萄孢萌发的作用第34-35页
   ·BRG1 突变体的鉴定及BRG1 基因的功能分析第35-40页
     ·brg1 突变体的PCR 鉴定第35页
     ·brg1 突变体中T-DNA 的插入拷贝数分析第35-36页
     ·brg1 突变体的RT-PCR 鉴定第36-37页
     ·brg1 突变体的抗病性测定第37页
     ·brg1 突变体的非生物胁迫试验第37-39页
     ·brg1 突变体的RT-PCR 分析第39-40页
   ·BRG1 基因的互补回复和超表达试验第40-44页
     ·BRG1 基因表达载体的构建及拟南芥转化第40-41页
     ·转基因阳性苗的筛选第41页
     ·转基因株系的分子鉴定第41-42页
     ·转基因株系的RT-PCR 验证第42页
     ·转基因株系的表型验证第42-44页
4 讨论第44-47页
   ·BRG1 基因与拟南芥抗灰葡萄孢之间的关系第44页
   ·BRG1 基因与抗病防御途径之间的关系第44-45页
   ·下一步工作第45-47页
     ·BRG1 基因所属抗病途径的确定第45页
     ·双向电泳技术获得差异表达蛋白第45-46页
     ·酵母双杂交技术筛选BRG1 蛋白的互作蛋白第46-47页
5 结论第47-48页
参考文献第48-54页
在读期间发表的学术论文第54-55页
作者简历第55-56页
致谢第56-57页

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