| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第6-11页 |
| 绪论 | 第11-18页 |
| 第一部分 胃癌组织中M2型巨噬细胞浸润与胃癌的进展密切相关 | 第18-35页 |
| 1.1 材料与方法 | 第18-27页 |
| 1.1.1 主要仪器 | 第18页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.3 组织标本 | 第19页 |
| 1.1.4 免疫组织化学 | 第19-21页 |
| 1.1.5 组织标本消化 | 第21-22页 |
| 1.1.6 流式细胞术分析组织来源巨噬细胞表型 | 第22-23页 |
| 1.1.7 流式分选组织来源巨噬细胞 | 第23-24页 |
| 1.1.8 RNA提取与测定 | 第24-25页 |
| 1.1.9 Real-time PCR | 第25-27页 |
| 1.1.10 统计分析 | 第27页 |
| 1.2 实验结果 | 第27-33页 |
| 1.2.1 胃癌组织中有大量TAMs浸润并且与胃癌的分期及进展呈正相关 | 第27-29页 |
| 1.2.2 胃癌组织中浸润TAMs主要为M2型巨噬细胞 | 第29-31页 |
| 1.2.3 胃癌组织中TAMs的浸润与胃癌的转移及不良预后密切相关 | 第31-33页 |
| 1.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第二部分 M2型巨噬细胞通过外泌体传递促进胃癌细胞的转移、耐药 | 第35-66页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-51页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第36页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第36-38页 |
| 2.1.3 细胞来源及培养 | 第38页 |
| 2.1.4 体外巨噬细胞极化模型的构建 | 第38-40页 |
| 2.1.5 流式细胞术分析体外诱导巨噬细胞表型 | 第40页 |
| 2.1.6 细胞免疫荧光 | 第40-41页 |
| 2.1.7 Elisa检测巨噬细胞培养上清细胞因子 | 第41页 |
| 2.1.8 细胞RNA的提取及Real-time PCR检测 | 第41-44页 |
| 2.1.9 细胞共培养及transwell实验 | 第44-45页 |
| 2.1.10 外泌体的分离与鉴定 | 第45-46页 |
| 2.1.11 细胞活性检测 | 第46-47页 |
| 2.1.12 细胞周期分析 | 第47-48页 |
| 2.1.13 细胞凋亡分析 | 第48页 |
| 2.1.14 蛋白免疫印迹 | 第48-49页 |
| 2.1.15 裸鼠体内动物实验 | 第49-50页 |
| 2.1.16 统计分析 | 第50-51页 |
| 2.2 实验结果 | 第51-63页 |
| 2.2.1 体外诱导极化巨噬细胞的鉴定 | 第51-55页 |
| 2.2.2 M2型巨噬细胞促进胃癌细胞的迁移和侵袭 | 第55-56页 |
| 2.2.3 M2型巨噬细胞促进胃癌细胞对顺铂的化疗耐药 | 第56-58页 |
| 2.2.4 M2型巨噬细胞来源外泌体的分离、鉴定及摄取实验 | 第58-59页 |
| 2.2.5 M2型巨噬细胞来源外泌体促进胃癌细胞的迁移和侵袭 | 第59-61页 |
| 2.2.6 M2型巨噬细胞来源外泌体促进胃癌细胞对顺铂的化疗耐药 | 第61-63页 |
| 2.3 讨论 | 第63-66页 |
| 第三部分 M2型巨噬细胞通过外泌体传递ApoE激活PI3K-AKT途径促进胃癌细胞的转移 | 第66-89页 |
| 3.1 材料和方法 | 第66-77页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第66-67页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第67-68页 |
| 3.1.3 细胞来源及培养 | 第68-69页 |
| 3.1.4 体外巨噬细胞极化模型的构建 | 第69页 |
| 3.1.5 流式细胞术分析体外诱导巨噬细胞表型 | 第69页 |
| 3.1.6 M2型巨噬细胞来源外泌体的分离 | 第69-70页 |
| 3.1.7 外泌体蛋白质谱分析 | 第70-71页 |
| 3.1.8 载体转染 | 第71-72页 |
| 3.1.9 细胞免疫荧光 | 第72页 |
| 3.1.10 Transwell实验检测胃癌细胞的迁移及侵袭能力 | 第72-73页 |
| 3.1.11 胃癌细胞生长曲线 | 第73页 |
| 3.1.12 细胞RNA的提取及RT-PCR检测 | 第73-75页 |
| 3.1.13 免疫蛋白印迹 | 第75-76页 |
| 3.1.14 细胞周期及凋亡检测 | 第76页 |
| 3.1.15 免疫组织化学 | 第76-77页 |
| 3.1.16 裸鼠体内肺部转移实验 | 第77页 |
| 3.1.17 统计分析 | 第77页 |
| 3.2 实验结果 | 第77-86页 |
| 3.2.1 M2型巨噬细胞高表达ApoE并且可以通过外泌体包裹传递至胃癌细胞 | 第77-79页 |
| 3.2.2 M2型巨噬细胞通过外泌体传递ApoE从而增强胃癌细胞的转移能力 | 第79-81页 |
| 3.2.3 ApoE蛋白通过激活PI3K-AKT通路影响胃癌细胞的细胞骨架重塑从而增强其转移能力 | 第81-84页 |
| 3.2.4 临床资料显示ApoE的表达与胃癌的转移及不良预后密切相关 | 第84-86页 |
| 3.3 讨论 | 第86-89页 |
| 第四部分 M2型巨噬细胞通过外泌体传递miR-21增强胃癌细胞对顺铂的化疗耐药 | 第89-103页 |
| 4.1 材料和方法 | 第89-95页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第89-90页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第90页 |
| 4.1.3 细胞来源及培养 | 第90页 |
| 4.1.4 M2型巨噬细胞来源外泌体miRNA microarray | 第90页 |
| 4.1.5 miRNA mimics转染 | 第90-91页 |
| 4.1.6 细胞免疫荧光 | 第91-92页 |
| 4.1.7 miRNA的提取及RT-PCR检测 | 第92-93页 |
| 4.1.8 免疫蛋白印迹 | 第93页 |
| 4.1.9 细胞凋亡检测 | 第93-94页 |
| 4.1.10 细胞活性检测 | 第94页 |
| 4.1.11 平板克隆形成实验 | 第94页 |
| 4.1.12 裸鼠皮下成瘤实验 | 第94-95页 |
| 4.1.13 统计分析 | 第95页 |
| 4.2 实验结果 | 第95-101页 |
| 4.2.1 M2型巨噬细胞通过外泌体传递miR-21分子至胃癌细胞 | 第95-97页 |
| 4.2.2 体内外实验证实miR-21促进胃癌细胞对顺铂的化疗耐药 | 第97-99页 |
| 4.2.3 miR-21通过调控PTEN增强胃癌细胞的抗凋亡能力 | 第99-101页 |
| 4.3 讨论 | 第101-103页 |
| 全文总结 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第112-114页 |
