| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-22页 |
| 0.1 淀粉样蛋白沉积疾病及淀粉样纤维 | 第13-14页 |
| 0.2 经典淀粉样蛋白 | 第14-16页 |
| 0.2.1 溶菌酶 | 第14-15页 |
| 0.2.2 Amyloid-β | 第15-16页 |
| 0.3 小分子抑制剂 | 第16-18页 |
| 0.3.1 桑色素 | 第17页 |
| 0.3.2 木脂素 | 第17页 |
| 0.3.3 环肽 | 第17-18页 |
| 0.4 胞内老化淀粉样蛋白微环境的模拟 | 第18-20页 |
| 0.4.1 毕赤酵母(P.pastoris) | 第18页 |
| 0.4.2 PDI(蛋白二硫键异构酶) | 第18-20页 |
| 0.4.3 CRISPR/Cas9 | 第20页 |
| 0.5 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第1章 天然小分子对鸡溶菌酶成纤维的抑制 | 第22-30页 |
| 1.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1.1 试剂及耗材 | 第22页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第22页 |
| 1.1.3 主要化学试剂的配制 | 第22-23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-24页 |
| 1.2.1 溶菌酶淀粉样蛋白纤维的培养 | 第23-24页 |
| 1.2.2 ThT荧光检测 | 第24页 |
| 1.2.3 生物统计学数据处理 | 第24页 |
| 1.3 实验结果与讨论 | 第24-28页 |
| 1.3.1 利用ThT荧光检测桑色素对鸡溶菌酶产生淀粉样纤维的影响 | 第24-25页 |
| 1.3.2 利用ThT荧光检测木脂素对鸡溶菌酶产生淀粉样纤维的影响 | 第25-27页 |
| 1.3.3 利用THT荧光检测环肽对鸡溶菌酶产生淀粉样纤维的影响 | 第27-28页 |
| 1.4 本章小结 | 第28-30页 |
| 第2章 人源淀粉样蛋白Amyloid-β毕赤酵母表达系统构建 | 第30-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-35页 |
| 2.1.1 主要试剂及耗材 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 2.1.3 实验引物 | 第31页 |
| 2.1.4 培养基与化学试剂的配制 | 第31-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.2.1 Amyloid-β蛋白基因的获取 | 第35页 |
| 2.2.2 构建pGAPZαA-Amyloid-β穿梭质粒 | 第35-36页 |
| 2.2.3 构建pGAPZαA-Amyloid-β表达菌株 | 第36页 |
| 2.2.4 诱导表达Amyloid-β蛋白 | 第36-37页 |
| 2.2.5 Western-blot分析 | 第37-38页 |
| 2.2.6 提取酵母基因组进行PCR验证 | 第38页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第38-41页 |
| 2.3.1 人源Amyloid-β蛋白 | 第38-39页 |
| 2.3.2 构建pGAPZαA-Amyloid-β外源蛋白穿梭质粒 | 第39-40页 |
| 2.3.3 构建pGAPZαA-Amyloid-β表达菌株 | 第40页 |
| 2.3.4 表达蛋白的Western-blot验证与菌株总DNA的PCR验证 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第3章 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除毕赤酵母PDI基因 | 第43-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-47页 |
| 3.1.1 试剂及耗材 | 第43-44页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.1.3 培养基与化学试剂的配制 | 第45-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.2.1 构建Cas9蛋白表达模块 | 第47页 |
| 3.2.2 构建gRNA转录模块 | 第47-48页 |
| 3.2.3 构建抗性基因筛选模块 | 第48页 |
| 3.2.4 构建CRISPR/Cas9基因编辑质粒 | 第48-49页 |
| 3.2.5 构建PDI同源供体模块 | 第49页 |
| 3.2.6 转化毕赤酵母并验证 | 第49页 |
| 3.2.7 PDI结构缺损蛋白基因的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.8 利用同源互换的方法构建PDI蛋白结构缺损菌株 | 第50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-58页 |
| 3.3.1 构建Cas9蛋白表达模块 | 第50-52页 |
| 3.3.2 构建gRNA转录模块 | 第52-53页 |
| 3.3.3 构建抗性基因筛选模块 | 第53-55页 |
| 3.3.4 构建CRISPR/Cas9基因编辑质粒 | 第55页 |
| 3.3.5 构建PDI同源供体模块 | 第55页 |
| 3.3.6 转化毕赤酵母并验证 | 第55-57页 |
| 3.3.7 PDI结构缺损蛋白基因的构建 | 第57-58页 |
| 3.3.8 利用同源互换的方法构建PDI蛋白结构缺损菌株 | 第58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 结论与展望 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第67-68页 |
