| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第1部分 绪论 | 第20-50页 |
| 第1章 选题依据及研究内容 | 第20-50页 |
| 1.1 选题意义 | 第20-22页 |
| 1.2 致病细菌检测研究现状 | 第22-34页 |
| 1.2.1 传统培养技术 | 第22-23页 |
| 1.2.2 分子生物学技术 | 第23-24页 |
| 1.2.3 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 | 第24-26页 |
| 1.2.4 基于分子识别模式的致病细菌检测 | 第26-34页 |
| 1.3 抗菌药物敏感性试验研究现状 | 第34-39页 |
| 1.3.1 传统培养方法 | 第34-36页 |
| 1.3.2 基于细菌遗传物质的PCR方法 | 第36-37页 |
| 1.3.3 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 | 第37页 |
| 1.3.4 微流控 | 第37-38页 |
| 1.3.5 荧光分析法 | 第38-39页 |
| 1.3.6 电化学分析法 | 第39页 |
| 1.4 噬菌体 | 第39-48页 |
| 1.4.1 噬菌体的基本生物学特性 | 第40-42页 |
| 1.4.2 噬菌体在致病细菌检测及抗菌药物敏感性试验中的应用 | 第42-48页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第48-50页 |
| 第2部分 致病细菌识别物质的筛选 | 第50-70页 |
| 第2章 铜绿假单胞菌噬菌体PAP1的分离 | 第50-58页 |
| 2.1 前言 | 第50页 |
| 2.2 材料与设备 | 第50-52页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第50-51页 |
| 2.2.2 主要设备 | 第51页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第51-52页 |
| 2.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 2.3.1 铜绿假单胞菌的培养 | 第52页 |
| 2.3.2 铜绿假单胞菌噬菌体PAP1的分离 | 第52页 |
| 2.3.3 噬菌体PAP1混悬液的制备与纯化 | 第52页 |
| 2.3.4 噬菌体PAP1滴度测定 | 第52-53页 |
| 2.3.5 噬菌体PAP1的形态学观察 | 第53页 |
| 2.3.6 噬菌体PAP1的最佳感染复数 | 第53页 |
| 2.3.7 噬菌体PAP1的一步生长曲线的绘制 | 第53页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第53-56页 |
| 2.4.1 噬菌体PAP1的分离 | 第53-54页 |
| 2.4.2 噬菌体PAP1的电镜形态 | 第54页 |
| 2.4.3 噬菌体PAP1的最佳感染复数 | 第54-55页 |
| 2.4.4 噬菌体PAP1的一步生长曲线 | 第55-56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第3章 噬菌体尾丝蛋白P069的表达纯化 | 第58-70页 |
| 3.1 前言 | 第58页 |
| 3.2 材料与设备 | 第58-60页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第58-59页 |
| 3.2.2 主要设备 | 第59页 |
| 3.2.3 主要溶液配制 | 第59-60页 |
| 3.3 实验方法 | 第60-65页 |
| 3.3.1 P069基因提取 | 第60-61页 |
| 3.3.2 pET-21a质粒DNA的提取 | 第61-62页 |
| 3.3.3 P069基因的PCR扩增 | 第62页 |
| 3.3.4 P069基因重组载体构建 | 第62-63页 |
| 3.3.5 感受态转化及阳性克隆筛选 | 第63页 |
| 3.3.6 P069小量表达与鉴定 | 第63-64页 |
| 3.3.7 P069大量表达 | 第64页 |
| 3.3.8 包涵体蛋白纯化 | 第64页 |
| 3.3.9 包涵体蛋白复性 | 第64-65页 |
| 3.3.10 复性蛋白纯化 | 第65页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第65-69页 |
| 3.4.1 尾丝蛋白P069 | 第65页 |
| 3.4.2 重组载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.4.3 P069小量表达 | 第66页 |
| 3.4.4 P069大量表达 | 第66-68页 |
| 3.4.5 P069蛋白复性 | 第68页 |
| 3.4.6 P069蛋白纯化 | 第68-69页 |
| 3.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第3部分 致病细菌检测和抗菌药物敏感性试验 | 第70-130页 |
| 第4章 基于噬菌体功能化磁性纳米颗粒的生物发光法检测铜绿假单胞菌 | 第70-88页 |
| 4.1 前言 | 第70-72页 |
| 4.2 材料与设备 | 第72-73页 |
| 4.2.1 主要材料 | 第72-73页 |
| 4.2.2 主要设备 | 第73页 |
| 4.2.3 主要溶液配制 | 第73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73-76页 |
| 4.3.1 铜绿假单胞菌菌液的准备 | 第73-74页 |
| 4.3.2 高滴度的噬菌体PAP1的制备 | 第74页 |
| 4.3.3 FITC标记噬菌体PAP1 | 第74-75页 |
| 4.3.4 荧光染色铜绿假单胞菌的激光共聚焦显微成像 | 第75页 |
| 4.3.5 噬菌体PAP1功能化甲苯磺基磁珠 | 第75页 |
| 4.3.6 铜绿假单胞菌检测 | 第75-76页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第76-86页 |
| 4.4.1 噬菌体PAP1的基本生物学特性 | 第76页 |
| 4.4.2 原理 | 第76-78页 |
| 4.4.3 噬菌体PAP1功能化的甲苯磺基磁珠 | 第78-80页 |
| 4.4.4 检测条件优化 | 第80-82页 |
| 4.4.5 标准曲线的制定 | 第82页 |
| 4.4.6 特异性分析 | 第82-83页 |
| 4.4.7 不同营养条件影响考察 | 第83-85页 |
| 4.4.8 实际样品检测 | 第85-86页 |
| 4.5 本章小结 | 第86-88页 |
| 第5章 基于铜绿假单胞菌活力鉴别的抗菌药物敏感性试验 | 第88-100页 |
| 5.1 前言 | 第88-90页 |
| 5.2 材料与设备 | 第90-92页 |
| 5.2.1 主要材料 | 第90-91页 |
| 5.2.2 主要设备 | 第91页 |
| 5.2.3 主要溶液配制 | 第91-92页 |
| 5.3 实验方法 | 第92页 |
| 5.3.1 铜绿假单胞菌培养 | 第92页 |
| 5.3.2 裂解时间测定 | 第92页 |
| 5.3.3 铜绿假单胞菌含量测定 | 第92页 |
| 5.3.4 铜绿假单胞菌药物敏感性试验 | 第92页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第92-98页 |
| 5.4.1 基于铜绿假单胞菌活力鉴别的抗菌药物敏感性试验的原理 | 第92-94页 |
| 5.4.2 裂解时间 | 第94-95页 |
| 5.4.3 铜绿假单胞菌检测 | 第95-96页 |
| 5.4.4 药敏试验 | 第96-98页 |
| 5.5 本章小结 | 第98-100页 |
| 第6章 基于噬菌体尾丝蛋白识别的铜绿假单胞菌检测 | 第100-114页 |
| 6.1 前言 | 第100页 |
| 6.2 材料与设备 | 第100-102页 |
| 6.2.1 主要材料 | 第100-101页 |
| 6.2.2 主要设备 | 第101页 |
| 6.2.3 主要溶液配制 | 第101-102页 |
| 6.3 实验方法 | 第102-104页 |
| 6.3.1 细菌培养 | 第102页 |
| 6.3.2 TRITC标记尾丝蛋白P069 | 第102页 |
| 6.3.3 P069功能化磁性颗粒 | 第102页 |
| 6.3.4 荧光染色成像 | 第102-103页 |
| 6.3.5 P069的特异性检测 | 第103页 |
| 6.3.6 双位点识别荧光检测铜绿假单胞菌 | 第103页 |
| 6.3.7 单位点识别测铜绿假单胞菌 | 第103-104页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第104-112页 |
| 6.4.1 尾丝蛋白P069的结合能力 | 第104页 |
| 6.4.2 尾丝蛋白P069的裂解活性 | 第104-105页 |
| 6.4.3 尾丝蛋白P069的特异性 | 第105-107页 |
| 6.4.4 荧光检测铜绿假单胞菌 | 第107-109页 |
| 6.4.5 生物发光检测铜绿假单胞菌 | 第109-112页 |
| 6.4.6 实际样品检测 | 第112页 |
| 6.5 本章小结 | 第112-114页 |
| 第7章 基于IgG和替考拉宁识别的夹心荧光法检测金黄色葡萄球菌及其药敏试验 | 第114-130页 |
| 7.1 前言 | 第114-117页 |
| 7.2 材料与设备 | 第117-119页 |
| 7.2.1 主要材料 | 第117-118页 |
| 7.2.2 主要设备 | 第118页 |
| 7.2.3 主要溶液配制 | 第118-119页 |
| 7.3 实验方法 | 第119-121页 |
| 7.3.1 细菌培养 | 第119页 |
| 7.3.2 FITC标记替考拉宁 | 第119-120页 |
| 7.3.3 荧光染色成像 | 第120页 |
| 7.3.4 金黄色葡萄球菌检测 | 第120页 |
| 7.3.5 金黄色葡萄球菌的抗菌药物敏感性试验 | 第120-121页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第121-127页 |
| 7.4.1 金黄色葡萄球菌检测和抗菌药物敏感性试验的原理 | 第121-122页 |
| 7.4.2 检测条件优化 | 第122-123页 |
| 7.4.3 标准曲线的制定 | 第123页 |
| 7.4.4 特异性 | 第123-124页 |
| 7.4.5 实际样品检测 | 第124-125页 |
| 7.4.6 金黄色葡萄球菌的抗菌药物敏感性试验 | 第125-127页 |
| 7.5 本章小结 | 第127-130页 |
| 第4部分 总结与展望 | 第130-136页 |
| 第8章 总结与展望 | 第130-136页 |
| 8.1 全文总结 | 第130-133页 |
| 8.2 本论文的创新点 | 第133页 |
| 8.3 展望 | 第133-136页 |
| 参考文献 | 第136-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 博士期间科研成果 | 第156-157页 |
