| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1.1 H5N1亚型禽流感病毒的危害 | 第14-18页 |
| 1.1.1 病原学 | 第14-15页 |
| 1.1.2 H5N1流感病毒的发生与流行 | 第15-18页 |
| 1.1.3 H5N1流感病毒的威胁 | 第18页 |
| 1.2 流感病毒的生命周期 | 第18-27页 |
| 1.2.1 流感病毒侵入 | 第19-21页 |
| 1.2.2 vRNPs入核 | 第21-22页 |
| 1.2.3 病毒基因组的转录和复制 | 第22-23页 |
| 1.2.4 vRNPs的核输出 | 第23-24页 |
| 1.2.5 组装和出芽 | 第24-27页 |
| 1.3 宿主膜蛋白在流感感染过程中的意义 | 第27-29页 |
| 1.3.1 宿主膜蛋白与病毒入侵 | 第28页 |
| 1.3.2 宿主膜蛋白与信号传递 | 第28页 |
| 1.3.3 宿主膜蛋白与病毒的组装出芽 | 第28-29页 |
| 1.4 宿主蛋白的鉴定 | 第29-32页 |
| 1.5 BN/SDS-PAGE的原理及应用 | 第32-35页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第35-36页 |
| 第3章 材料和方法 | 第36-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-45页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.2 主要缓冲液 | 第37-42页 |
| 3.1.3 细胞系及毒株 | 第42页 |
| 3.1.4 质粒 | 第42-45页 |
| 3.1.5 使用菌株及培养条件 | 第45页 |
| 3.1.6 仪器设备及软件 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-63页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第45页 |
| 3.2.2 病毒增殖 | 第45-46页 |
| 3.2.3 显微镜成像及间接免疫荧光 | 第46页 |
| 3.2.4 病毒感染A549细胞及蛋白提取 | 第46-47页 |
| 3.2.5 蛋白定量 | 第47页 |
| 3.2.6 双向电泳分析 | 第47-48页 |
| 3.2.7 银染 | 第48页 |
| 3.2.8 凝胶扫描和图像分析 | 第48-49页 |
| 3.2.9 胶内酶解 | 第49页 |
| 3.2.10 MALDI-TOF/TOF MS质谱分析及数据检索 | 第49-50页 |
| 3.2.11 差异蛋白的Western-blot验证 | 第50页 |
| 3.2.12 差异蛋白质的生物信息学分析 | 第50页 |
| 3.2.13 siRNA的设计与合成 | 第50-51页 |
| 3.2.14 siRNA转染 | 第51页 |
| 3.2.15 病毒感染A549细胞 | 第51-52页 |
| 3.2.16 蛋白水平评价siRNA的干扰效果 | 第52页 |
| 3.2.17 引物的设计与合成 | 第52页 |
| 3.2.18 RNA水平评价siRNA的干扰效果 | 第52-54页 |
| 3.2.19 ELISA检测病毒含量 | 第54-55页 |
| 3.2.20 空斑测定病毒含量 | 第55页 |
| 3.2.21 BN/SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| 3.2.22 质粒的构建 | 第56-60页 |
| 3.2.23 去内毒素质粒的提取 | 第60-61页 |
| 3.2.24 质粒转染 | 第61页 |
| 3.2.25 免疫共沉淀 | 第61-62页 |
| 3.2.26 共定位分析 | 第62-63页 |
| 第4章 结果与分析 | 第63-91页 |
| 4.1 H5N1流感病毒感染相关宿主膜蛋白的鉴定 | 第63-77页 |
| 4.1.1 H5N1流感病毒感染A549细胞的动力学分析 | 第63-64页 |
| 4.1.2 膜蛋白样品的制备 | 第64-66页 |
| 4.1.3 膜蛋白质的双向电泳分离结果 | 第66-70页 |
| 4.1.4 差异蛋白点的质谱分析 | 第70-75页 |
| 4.1.5 差异蛋白点的Western-blot验证 | 第75页 |
| 4.1.6 鉴定蛋白参与的信号通路的分析 | 第75-77页 |
| 4.2 鉴定蛋白对H5N1亚型禽流感病毒增殖的影响 | 第77-81页 |
| 4.2.1 RNA水平检测转染siRNA对目的蛋白的干扰效果 | 第77-78页 |
| 4.2.2 蛋白水平检测转染siRNA对目的蛋白的干扰效果 | 第78-79页 |
| 4.2.3 ELISA方法评价目的蛋白干扰后病毒的增殖情况 | 第79-80页 |
| 4.2.4 空斑计数评价目的蛋白干扰后病毒的增殖情况 | 第80-81页 |
| 4.3 流感病毒与宿主蛋白相互作用复合物的鉴定 | 第81-91页 |
| 4.3.1 BN/SDS-PAGE所需膜蛋白样品的制备 | 第81-82页 |
| 4.3.2 BN/SDS-PAGE分离图谱 | 第82-84页 |
| 4.3.3 对选取的蛋白点进行质谱鉴定 | 第84-85页 |
| 4.3.4 用免疫共沉淀对鉴定到的互作蛋白进行验证 | 第85-87页 |
| 4.3.5 用蛋白定位的方法验证NS1蛋白与ANXA2蛋白的互作 | 第87-88页 |
| 4.3.6 用免疫共沉淀的方法鉴定与ANXA2互作的NS1的结构域 | 第88-91页 |
| 第5章 讨论 | 第91-106页 |
| 5.1 H5N1流感病毒感染相关宿主膜蛋白的鉴定 | 第91-96页 |
| 5.1.1 鉴定蛋白的亚细胞定位 | 第92页 |
| 5.1.2 细胞骨架/结构相关蛋白 | 第92-93页 |
| 5.1.3 转录/mRNA进程相关蛋白 | 第93-94页 |
| 5.1.4 代谢相关蛋白 | 第94-95页 |
| 5.1.5 流感病毒蛋白 | 第95-96页 |
| 5.2 鉴定蛋白对H5N1流感病毒增殖的影响 | 第96-102页 |
| 5.2.1 C1QBP蛋白 | 第96-97页 |
| 5.2.2 ANXA2蛋白 | 第97-98页 |
| 5.2.3 PHB蛋白 | 第98-100页 |
| 5.2.4 PRDX1蛋白 | 第100-101页 |
| 5.2.5 HSP90AB1蛋白 | 第101页 |
| 5.2.6 ITGA3蛋白 | 第101-102页 |
| 5.3 流感病毒与宿主蛋白相互作用复合物的鉴定 | 第102-106页 |
| 5.3.1 对BN/SDS-PAGE分离及鉴定的结果进行分析 | 第102-103页 |
| 5.3.2 NS1蛋白与ANXA2蛋白互作 | 第103-104页 |
| 5.3.3 NS1蛋白的效应结构域与ANXA2蛋白互作 | 第104-106页 |
| 第6章 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-127页 |
| 附录 | 第127-148页 |
| 个人简历 | 第148页 |
| 教育经历 | 第148页 |
| 发表论文 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
