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弓形虫感染早期家猫小肠转录组学和蛋白组学研究

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
第一章 引言第15-24页
    1.1 猫弓形虫病的发现历史第15-16页
    1.2 猫弓形虫病流行病学与分型研究进展第16-17页
    1.3 猫弓形虫病预防和诊断方法的研究进展第17-18页
    1.4 弓形虫在猫肠内发育的研究第18-20页
    1.5 弓形虫组学的研究进展第20-23页
        1.5.1 转录组学及弓形虫与宿主互作转录组的研究进展第20-22页
        1.5.2 蛋白质组学及弓形虫与宿主互作转录组的研究进展第22-23页
        1.5.3 弓形虫卵囊相关组学的研究第23页
    1.6 展望第23-24页
第二章 弓形虫感染早期家猫小肠转录组学的研究第24-52页
    2.1 材料与方法第24-28页
        2.1.1 试验动物和弓形虫虫株第24页
        2.1.2 主要试验仪器及试剂第24页
        2.1.3 试验设计及猫小肠组织的收集第24页
        2.1.4 猫小肠组织总RNA提取和质量鉴定第24-25页
        2.1.5 弓形虫感染的鉴定第25页
        2.1.6 转录组测序和基因组比对第25-26页
        2.1.7 差异表达基因的筛选鉴定与生物信息学分析第26页
        2.1.8 转录组测序的qRT-PCR验证第26-28页
    2.2 结果第28-49页
        2.2.1 中国狸花猫小肠组织的弓形虫鉴定和RNA质量检测第28页
        2.2.2 RNA测序结果第28-30页
        2.2.3 差异表达基因的分析第30-31页
        2.2.4 转录组测序结果的qRT-PCR验证第31-32页
        2.2.5 猫肠转录组的生物信息学分析第32-49页
    2.3 讨论第49-52页
        2.3.1 弓形虫感染早期狸花猫小肠的免疫反应第49-50页
        2.3.2 弓形虫感染与其它疾病的关系第50-51页
        2.3.3 雌激素信号通路对弓形虫卵囊发育的影响第51-52页
第三章 弓形虫感染早期家猫小肠蛋白组学的研究第52-81页
    3.1 材料与方法第52-57页
        3.1.1 试验动物和弓形虫虫株第52页
        3.1.2 主要试验仪器及试剂第52页
        3.1.3 试验设计及猫小肠组织的收集第52页
        3.1.4 猫小肠组织总蛋白的提取第52-53页
        3.1.5 iTRAQ标记及SCX分馏第53-54页
        3.1.6 LC-ESI-MS/MS分析第54页
        3.1.7 信息分析流程第54-55页
        3.1.8 弓形虫感染猫小肠早期蛋白组数据分析第55-56页
        3.1.9 弓形虫感染猫小肠早期蛋白组数据的PRM验证第56-57页
        3.1.10 转录组与蛋白组数据的关联分析第57页
    3.2 结果第57-78页
        3.2.1 标准曲线及样品蛋白质浓度第57-58页
        3.2.2 SDS胶检测图第58-59页
        3.2.3 鉴定结果统计第59页
        3.2.4 差异表达蛋白筛选结果统计第59-60页
        3.2.5 鉴定蛋白GO注释第60-62页
        3.2.6 差异蛋白质代谢通路(KEGG pathway)注释第62-71页
        3.2.7 蛋白相互作用(PPI)分析第71-74页
        3.2.8 弓形虫感染猫 0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、72 h和 96 h的韦恩图(Venn)分析第74-75页
        3.2.9 蛋白组数据的PRM验证第75页
        3.2.10 转录组与蛋白组数据的关联分析第75-78页
    3.3 讨论第78-81页
第四章 弓形虫感染家猫早期表达的蛋白的反应原性研究第81-97页
    4.1 材料与方法第81-88页
        4.1.1 主要试验仪器和试剂第81-82页
        4.1.2 猫小肠组织总RNA提取和质量鉴定第82页
        4.1.3 弓形虫感染猫早期表达基因的qRT-PCR验证第82-83页
        4.1.4 弓形虫感染猫早期表达基因的序列分析第83页
        4.1.5 弓形虫感染猫早期表达基因的序列扩增第83页
        4.1.6 Gene2-6 连接pMD?18-T载体第83页
        4.1.7 重组载体的转化及鉴定第83-84页
        4.1.8 重组载体pMD18-G2-6 的提取第84页
        4.1.9 重组载体的酶切及目的片段的回收第84-85页
        4.1.10 pET28a(+)质粒的酶切及回收第85-86页
        4.1.11 重组表达载体的构建与鉴定第86页
        4.1.12 重组蛋白的表达与纯化第86-87页
        4.1.13 猫弓形虫阴、阳血清的获得第87-88页
        4.1.14 重组表达蛋白的反应原性分析第88页
        4.1.15 猫弓形虫病ELISA方法的初步建立第88页
    4.2 结果第88-95页
        4.2.1 弓形虫感染猫早期表达基因的qRT-PCR验证第88-89页
        4.2.2 弓形虫感染猫早期表达基因的序列分析第89-91页
        4.2.3 蛋白表达第91-93页
        4.2.4 rTgPr2、rTgPr3、rTgPr4、rTgPr5和rTgPr6蛋白的纯化第93页
        4.2.5 猫弓形虫阴、阳血清的判定第93页
        4.2.6 rTgPr2、rTgPr3、rTgPr4、rTgPr5和rTgPr6蛋白反应原性的检测第93-94页
        4.2.7 猫弓形虫病ELISA方法的初步建立第94-95页
    4.3 讨论第95-97页
第五章 全文结论第97-98页
参考文献第98-109页
致谢第109-111页
作者简介第111页

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