| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| 1.1 森林微生物资源与森林健康 | 第8-9页 |
| 1.2 果胶简介 | 第9-11页 |
| 1.2.1 果胶的结构 | 第9-10页 |
| 1.2.2 果胶的分类 | 第10页 |
| 1.2.3 果胶的作用 | 第10-11页 |
| 1.3 果胶酶 | 第11-13页 |
| 1.3.1 果胶酶简介 | 第11页 |
| 1.3.2 果胶酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.3.3 果胶酶研究现状 | 第12-13页 |
| 1.4 果胶酸裂解酶 | 第13-15页 |
| 1.4.1 果胶酸裂解酶 | 第13-15页 |
| 1.4.2 果胶酸裂解酶的分类 | 第15页 |
| 1.5 宏基因组及应用 | 第15-16页 |
| 1.6 重组蛋白表达系统 | 第16-18页 |
| 1.6.1 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第16-17页 |
| 1.6.2 大肠杆菌表达系统 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-35页 |
| 2.1 材料、试剂及相关溶液配制 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第18页 |
| 2.1.2 酶和实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基及相关溶液配制 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-35页 |
| 2.2.1 宏基因组测序及果胶酸裂解酶基因序列筛选 | 第20-21页 |
| 2.2.2 土壤宏基因组的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 果胶酸裂解酶基因序列分析和引物设计 | 第22-23页 |
| 2.2.4 果胶酸裂解酶基因pel的扩增及测序 | 第23-25页 |
| 2.2.5 表达载体质粒的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.6 重组蛋白PEL在Escherichia coli中的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.7 果胶酸裂解酶基因pel在P.pastoris GS115中的诱导表达 | 第29-31页 |
| 2.2.8 重组果胶酸裂解酶31发酵罐诱导表达 | 第31页 |
| 2.2.9 重组酶蛋白纯化 | 第31页 |
| 2.2.10 PELA蛋白浓度的测定 | 第31-33页 |
| 2.2.11 重组酶蛋白PELA酶学性质的分析 | 第33-35页 |
| 2.2.12 PELA在苎麻脱胶中的应用 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-52页 |
| 3.1 宏基因测序 | 第35-41页 |
| 3.1.1 基因功能注释 | 第35-36页 |
| 3.1.2 果胶酶基因序列统计及分析 | 第36-38页 |
| 3.1.3 果胶裂解酶基因序列分析及进化树构建 | 第38-41页 |
| 3.2 土壤宏基因组的提取 | 第41-42页 |
| 3.3 pel基因的克隆 | 第42页 |
| 3.4 pET30a(+)-pel在E.coli的重组表达 | 第42-43页 |
| 3.5 果胶酸裂解酶基因pel在P.pastoris GS115中的表达 | 第43-44页 |
| 3.6 重组酶PELA的纯化 | 第44-45页 |
| 3.7 重组PELA酶学性质分析 | 第45-50页 |
| 3.7.1 重组PELA最适温度和pH的测定 | 第45页 |
| 3.7.2 重组酶PELA热稳定性和pH稳定性的测定 | 第45-46页 |
| 3.7.3 重组酶PELA底物特异性的测定 | 第46-47页 |
| 3.7.4 不同金属离子和相关化学试剂对重组酶PELA活性的影响 | 第47-49页 |
| 3.7.5 重组酶PELA的K_m值和V_(max)的测定 | 第49-50页 |
| 3.8 重组果胶酸裂解酶在苎麻脱胶中的应用 | 第50-52页 |
| 3.8.1 质量损失率的测定 | 第50页 |
| 3.8.2 形态学变化 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| Abstract | 第61-62页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
