| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 阿托伐他汀及其合成路线 | 第14-17页 |
| 1.2.1 阿托伐他汀简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 阿托伐他汀手性侧链中间体的化学合成路线 | 第15-16页 |
| 1.2.3 阿托伐他汀手性侧链中间体的生物法合成路线 | 第16-17页 |
| 1.3 羰基还原酶 | 第17-21页 |
| 1.3.1 羰基还原酶简介 | 第17页 |
| 1.3.2 羰基还原酶的结构 | 第17-19页 |
| 1.3.3 羰基还原酶的催化机制 | 第19-21页 |
| 1.3.3.1 辅酶结构 | 第19页 |
| 1.3.3.2 催化机制 | 第19-20页 |
| 1.3.3.3 催化过程中的prelog规则与anti-prelog规则 | 第20-21页 |
| 1.4 阿托伐他汀生化法合成过程中的羰基还原酶过程 | 第21-24页 |
| 1.5 本文研究内容和思路 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 快速筛选模型的建立及羰基还原酶菌种的筛选、鉴定 | 第29-43页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 筛选模型的建立 | 第29-34页 |
| 2.2.1 “2,4-二硝基苯肼法”的原理 | 第29-31页 |
| 2.2.2 碱性条件下2,4-二硝基苯肼反应前后的全波长扫描 | 第31页 |
| 2.2.3 “2,4-二硝基苯肼法”的标准曲线 | 第31-32页 |
| 2.2.4 产物及其差向异构体的化学法合成 | 第32-33页 |
| 2.2.5 HPLC分析方法的建立 | 第33-34页 |
| 2.3 羰基还原酶菌株的筛选 | 第34-41页 |
| 2.3.1 土样 | 第34页 |
| 2.3.2 药品 | 第34-35页 |
| 2.3.3 培养基成分 | 第35页 |
| 2.3.4 菌株筛选 | 第35-38页 |
| 2.3.4.1 菌株的初筛 | 第35页 |
| 2.3.4.2 菌株的复筛 | 第35-36页 |
| 2.3.4.3 活性与选择性测定 | 第36-37页 |
| 2.3.4.4 菌株的挑选 | 第37-38页 |
| 2.3.5 菌种的鉴定 | 第38-41页 |
| 2.3.5.1 菌种形态学鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.5.2 菌种的生理生化鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.5.3 菌种的18sDNA鉴定与系统发育树鉴定 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第三章 具有R-羰基还原酶活性菌株ZJB-09225发酵产酶条件的研究 | 第43-57页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 菌种 | 第43页 |
| 3.2.2 实验药品及试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 培养基的选择 | 第43-44页 |
| 3.2.4 实验仪器设备 | 第44-45页 |
| 3.2.5 菌种发酵与静息细胞的制备 | 第45页 |
| 3.2.6 生物量测定 | 第45页 |
| 3.2.7 静息细胞转化条件 | 第45页 |
| 3.2.8 分析方法 | 第45页 |
| 3.2.9 羰基还原酶酶活的测定 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-56页 |
| 3.3.1 菌种P.caribbic ZJB-09225的种子液生长曲线 | 第46页 |
| 3.3.2 碳源的种类及浓度对P.caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第46-48页 |
| 3.3.3 氮源的种类及浓度对P. caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第48-50页 |
| 3.3.4 金属离子的种类及浓度对P.caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第50-52页 |
| 3.3.5 培养基初始pH对P.caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.6 培养温度对P. caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.7 接种量对P. caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.8 培养时间对P.caribbic ZJB-09225发酵产酶的影响 | 第55-56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 Pichia caribbic ZJB-09225差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯的研究 | 第57-71页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 实验材料 | 第57-59页 |
| 4.2.1 菌种 | 第57页 |
| 4.2.2 实验药品及试剂 | 第57-58页 |
| 4.2.3 培养基 | 第58页 |
| 4.2.4 实验仪器设备 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 4.3.1 细胞培养条件 | 第59页 |
| 4.3.2 分析方法 | 第59页 |
| 4.3.3 静息细胞转化 | 第59-62页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第62-69页 |
| 4.4.1 辅助底物种类与浓度对P.caribbic ZJB-09225差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3羰基己酸叔丁酯的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.2 反应体系温度对P.caribbic ZJB-09225活性与选择性的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.3 反应体系pH对P. caribbic ZJB-09225活性与选择性的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.4 高底物浓度下P. caribbic ZJB-09225立体选择性还原6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯 | 第65-66页 |
| 4.4.5 两相反应体系的构建 | 第66-68页 |
| 4.4.6 中性红对P.caribbic ZJB-09225活性的影响 | 第68-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第74页 |
