| 项目资金来源 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 口蹄疫 | 第14-16页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第14-15页 |
| 1.2 FMDV生物学特征 | 第15-16页 |
| 1.3 口蹄疫病毒基因组结构 | 第16页 |
| 2 口蹄疫非结构蛋白3A | 第16-17页 |
| 3 口蹄疫的防控与诊断技术 | 第17-19页 |
| 3.1 口蹄疫的防控 | 第17-18页 |
| 3.2 口蹄疫的诊断技术 | 第18-19页 |
| 4 波形蛋白参与多种病毒感染的研究进展 | 第19-21页 |
| 4.1 波形蛋白的生物学特性 | 第19-20页 |
| 4.2 波形蛋白的生物学功能 | 第20-21页 |
| 4.3 波形蛋白参与病毒在细胞中的增殖过程 | 第21页 |
| 5 蛋白质相互作用研究进展 | 第21-25页 |
| 5.1 蛋白质相互作用概述 | 第21-22页 |
| 5.2 蛋白质相互作用研究方法 | 第22-25页 |
| 6 本研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 验证FMDV3A与波形蛋白的关系 | 第26-46页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1 细胞、质粒 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第26页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.1 GST-Pull down诱饵蛋白3A的构建 | 第27-31页 |
| 2.2 Vimentin原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.3 GST-Pull down鉴定蛋白的相互作用 | 第32-34页 |
| 2.4 荧光共定位对蛋白互作的验证 | 第34-36页 |
| 2.5 丙氨酸扫描确定3A关键结合位点 | 第36页 |
| 3 实验结果 | 第36-44页 |
| 3.1 诱饵蛋白3A的构建 | 第36-39页 |
| 3.2 捕获蛋白的构建 | 第39-41页 |
| 3.3 GST-Pull down证明3A与vimentin相互作用 | 第41-42页 |
| 3.4 荧光共定位 | 第42-43页 |
| 3.5 3A与vimentin互作关键氨基酸位点 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 探究FMDV复制过程中波形蛋白的变化 | 第46-54页 |
| 1 实验材料 | 第46页 |
| 1.1 细胞和病毒株 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-50页 |
| 2.1 FMDV感染对vimentin分布的影响 | 第46-47页 |
| 2.2 FMDV感染对vimentin蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.3 FMDV感染对vimentin mRNA水平的影响 | 第48-50页 |
| 3 实验结果 | 第50-52页 |
| 3.1 Vimentn形态学变化 | 第50-51页 |
| 3.2 Vimentin蛋白表达水平变化 | 第51页 |
| 3.3 Vimentin基因转录水平变化 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 研究波形蛋白在FMDV感染过程中的作用 | 第54-63页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-57页 |
| 2.1 pET-28a-Vim-BL21诱导表达 | 第54页 |
| 2.2 原核表达产物的纯化及蛋白复性 | 第54-55页 |
| 2.3 波形蛋白的病毒阻断免疫荧光分析 | 第55页 |
| 2.4 Real time-PCR绝对荧光定量检测波形蛋白对病毒感染细胞影响 | 第55-57页 |
| 2.5 流式细胞术检测波形蛋白在细胞内的分布 | 第57页 |
| 2.6 数据统计与分析 | 第57页 |
| 3 实验结果 | 第57-61页 |
| 3.1 波形蛋白的纯化及复性 | 第57-58页 |
| 3.2 波形蛋白抑制PRRSV感染Marc-145细胞 | 第58-60页 |
| 3.3 波形蛋白不影响FMDV感染PK-15细胞 | 第60页 |
| 3.4 细胞流式分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
| 硕士期间已发表论文 | 第73页 |
