| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 奶牛乳腺发育与泌乳 | 第13-15页 |
| 1.1.1 乳蛋白和乳脂肪的合成代谢 | 第13-14页 |
| 1.1.2 奶牛乳蛋白和乳脂肪合成主要信号转导途径研究 | 第14-15页 |
| 1.2 RNAN~6-甲基腺苷(m~6A)研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 M~6A甲基化概述 | 第15页 |
| 1.2.2 M~6A功能的研究 | 第15-16页 |
| 1.3 METTL3的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.1 METTL3概述 | 第16页 |
| 1.3.2 METTL3生物学功能研究 | 第16-17页 |
| 1.4 氨酰tRNA合成酶的相关研究 | 第17页 |
| 1.4.1 氨酰tRNA合成酶的结构与功能 | 第17页 |
| 1.4.2 甘氨酰tRNA合成酶的相关研究 | 第17页 |
| 1.5 实验目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 | 第20页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的培养纯化与鉴定 | 第22-25页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的冻存 | 第25页 |
| 2.3 METTL3对BMECs乳蛋白及乳脂肪合成的影响 | 第25-29页 |
| 2.3.1 METTL3过表达对BMECs乳蛋白及乳脂肪合成的影响 | 第25-29页 |
| 2.3.2 METTL3抑制对BMECs乳蛋白及乳脂肪的影响 | 第29页 |
| 2.4 METTL3对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第29-32页 |
| 2.4.1 METTL3过表达对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.2 METTL3抑制对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第30页 |
| 2.4.3 METTL3对其靶基因mRNAm~6A水平的影响 | 第30-32页 |
| 2.5 p-GlyRs与METTL3相互作用的机理研究 | 第32-33页 |
| 2.5.1 激光共聚焦共定位分析p-GlyRs与METTL3的相互作用 | 第32页 |
| 2.5.2 FRET验证p-GlyRs与METTL3的相互作用 | 第32-33页 |
| 2.6 GlyRS对METTL3的体外激活 | 第33-36页 |
| 2.6.1 METTL3的原核表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.6.2 体外激酶实验检测p-GlyRS对METTL3的磷酸化作用 | 第34-36页 |
| 2.7 数据分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-52页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第37-38页 |
| 3.1.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2 METTL3过表达对BMECs乳蛋白及乳脂肪合成的影响 | 第39-42页 |
| 3.2.1 METTL3过表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 METTL3过表达对BMECs乳蛋白相关蛋白表达变化 | 第40-41页 |
| 3.2.3 METTL3过表达对BMECs乳脂肪合成的影响 | 第41-42页 |
| 3.3 METTL3抑制对BMECs乳蛋白及乳脂肪合成的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.1 METTL3干扰片段的转染 | 第42页 |
| 3.3.2 METTL3抑制对BMECs乳合成相关蛋白表达变化 | 第42-43页 |
| 3.3.3 METTL3抑制对BMECs乳脂肪合成的影响 | 第43-44页 |
| 3.4 METTL3对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.1 METTL3过表达对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第44页 |
| 3.4.2 METTL3抑制对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 METTL3对其靶基因mRNAm~6A水平的影响 | 第45页 |
| 3.5 p-GlyRS与METTL3相互作用的研究 | 第45-48页 |
| 3.5.1 相关载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.5.2 METTL3基因在乳腺上皮细胞中的定位 | 第46页 |
| 3.5.3 激光共聚焦共定位分析p-GlyRS与METTL3的相互作用 | 第46-47页 |
| 3.5.4 FRET验证p-GlyRS与METTL3的相互作用 | 第47-48页 |
| 3.6 p-GlyRS对METTL3的体外激活 | 第48-52页 |
| 3.6.1 METTL3的原核表达与纯化 | 第48-50页 |
| 3.6.2 体外激酶实验检测p-GlyRS对METTL3的磷酸化作用 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定 | 第52页 |
| 4.2 METTL3对乳蛋白及乳脂肪合成的影响及其机理 | 第52-53页 |
| 4.2.1 METTL3对乳蛋白及乳脂肪合成的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.2 METTL3对BMECs中mRNAm~6A水平的影响 | 第53页 |
| 4.3 p-GlyRS调节METTL3的分子机理 | 第53-55页 |
| 4.3.1 p-GlyRS与METTL3的相互作用 | 第53页 |
| 4.3.2 纯化后的p-GlyRS蛋白与METTL3激酶反应 | 第53-55页 |
| 4.4 蛋氨酸、雌激素对METTL3的调节作用 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
