| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 前言 | 第12页 |
| 1.2 东方粘虫概述 | 第12-13页 |
| 1.3 昆虫的V-ATPase | 第13页 |
| 1.4 RNAi技术在害虫防治中的研究现状 | 第13-21页 |
| 1.4.1 昆虫RNAi技术的基本原理 | 第14-16页 |
| 1.4.2 昆虫RNAi的方法 | 第16-18页 |
| 1.4.3 影响昆虫RNAi的因素 | 第18-19页 |
| 1.4.4 RNAi在昆虫中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4.5 利用RNAi防治害虫存在的问题及展望 | 第20-21页 |
| 1.5 本论文研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 东方粘虫V-ATPase B亚基基因的克隆 | 第22-38页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第22页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.3 试验方法 | 第22-28页 |
| 2.3.1 特异引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.3.2 东方粘虫总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.3.3 已知序列验证 | 第23-24页 |
| 2.3.4 3'-RACE | 第24-25页 |
| 2.3.5 5'-RACE | 第25-28页 |
| 2.3.6 序列拼接 | 第28页 |
| 2.3.7 序列分析与同源性比较 | 第28页 |
| 2.4 结果分析 | 第28-37页 |
| 2.4.1 总RNA的提取结果 | 第28-29页 |
| 2.4.2 已知序列验证 | 第29页 |
| 2.4.3 3'-RACE扩增结果和序列分析 | 第29-31页 |
| 2.4.4 5'-RACE扩增结果和序列分析 | 第31-32页 |
| 2.4.5 5'-RACE序列验证结果 | 第32-33页 |
| 2.4.6 3'-RACE与5'-RACE序列拼接 | 第33页 |
| 2.4.7 东方粘虫V-ATPase B亚基基因cDNA全长序列分析 | 第33-37页 |
| 2.5 小结讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 dsRNA序列的设计与合成 | 第38-47页 |
| 3.1 前言 | 第38-39页 |
| 3.2 选择靶标位点 | 第39-40页 |
| 3.3 材料与试剂 | 第40页 |
| 3.3.1 主要试剂 | 第40页 |
| 3.3.2 主要仪器 | 第40页 |
| 3.4 试验方法 | 第40-44页 |
| 3.4.1 特异引物设计与合成 | 第40-41页 |
| 3.4.2 总RNA的提取 | 第41页 |
| 3.4.3 cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| 3.4.4 PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.4.5 PCR产物的回收 | 第42页 |
| 3.4.6 连接反应 | 第42页 |
| 3.4.7 转化 | 第42-43页 |
| 3.4.8 转化子的筛选和质粒DNA的提取 | 第43页 |
| 3.4.9 重组质粒的鉴定 | 第43页 |
| 3.4.10 测序和序列分析 | 第43页 |
| 3.4.11 体外转录获得dsRNA | 第43-44页 |
| 3.5 结果分析 | 第44-45页 |
| 3.5.1 对应三段dsRNA的cDNA的PCR产物电泳结果 | 第44页 |
| 3.5.2 体外转录dsRNA电泳结果 | 第44-45页 |
| 3.6 小结讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 注射dsRNA对东方粘虫V-ATPase B亚基基因表达的影响 | 第47-57页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第47页 |
| 4.2.1 供试虫源 | 第47页 |
| 4.2.2 实验仪器及试剂 | 第47页 |
| 4.3 试验方法 | 第47-49页 |
| 4.3.1 dsRNA的微量注射 | 第47-48页 |
| 4.3.2 东方粘虫总RNA的提取 | 第48页 |
| 4.3.3 cDNA第一链的合成 | 第48页 |
| 4.3.4 引物设计 | 第48页 |
| 4.3.5 qRT-PCR | 第48-49页 |
| 4.3.6 透射电镜切片的制备 | 第49页 |
| 4.4 结果分析 | 第49-54页 |
| 4.4.1 注射dsRNA后对东方粘虫幼虫发育的影响 | 第49-50页 |
| 4.4.2 注射dsRNA后对东方粘虫存活的影响 | 第50-51页 |
| 4.4.3 注射dsRNA后期表型变化观察结果 | 第51-52页 |
| 4.4.4 RNAi对东方粘虫V-ATPase B亚基表达量的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.5 注射V-ATPase B亚基dsRNA后的电镜观察 | 第53-54页 |
| 4.5 小结讨论 | 第54-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 5.1 结论 | 第57页 |
| 5.2 研究创新点 | 第57页 |
| 5.3 进一步研究计划 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 缩略词 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
