| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略语表 | 第13-17页 |
| 1 文献综述 | 第17-33页 |
| 1.1 流感病毒简介 | 第17页 |
| 1.2 流感病毒的爆发流行 | 第17-18页 |
| 1.3 流感病毒的主要蛋白及其功能 | 第18-21页 |
| 1.3.1 流感病毒的聚合酶 | 第19-20页 |
| 1.3.2 流感病毒的血凝素和神经氨酸酶 | 第20-21页 |
| 1.3.3 流感病毒的基质蛋白 | 第21页 |
| 1.3.4 流感病毒的非结构蛋白 | 第21页 |
| 1.3.5 流感病毒的核衣壳蛋白 | 第21页 |
| 1.4 流感病毒的生命周期 | 第21-23页 |
| 1.5 天然免疫与模式识别受体 | 第23-28页 |
| 1.5.1 病原相关分子模式 | 第23页 |
| 1.5.2 模式识别受体 | 第23-28页 |
| 1.5.2.1 Toll样受体 | 第24-26页 |
| 1.5.2.2 RIG-I样受体 | 第26-27页 |
| 1.5.2.3 NOD样受体 | 第27-28页 |
| 1.5.2.4 DNA识别受体 | 第28页 |
| 1.6 流感病毒诱导的IFN-β的表达与调控 | 第28-32页 |
| 1.6.1 IFN-β及其表达调控 | 第28-29页 |
| 1.6.2 IRF3的激活及其调控机制 | 第29-30页 |
| 1.6.3 转录共刺激因子与干扰素表达调控 | 第30-32页 |
| 1.7 AGO2的结构和功能简介 | 第32-33页 |
| 2 目的与意义 | 第33-34页 |
| 3 材料与方法 | 第34-61页 |
| 3.1 材料 | 第34-38页 |
| 3.1.1 细胞和鸡胚 | 第34页 |
| 3.1.2 质粒、菌株和病毒株 | 第34-35页 |
| 3.1.3 抗体 | 第35页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第35-37页 |
| 3.1.5 引物及si RNA | 第37页 |
| 3.1.6 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.1.7 实验室条件 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-61页 |
| 3.2.1 常用试剂的配制 | 第38-39页 |
| 3.2.2 细胞的复苏与传代培养 | 第39-40页 |
| 3.2.2.1 细胞的复苏 | 第39页 |
| 3.2.2.2 细胞的传代培养 | 第39-40页 |
| 3.2.3 细胞总RNA的提取和反转录 | 第40-41页 |
| 3.2.3.1 细胞总RNA的提取 | 第40页 |
| 3.2.3.2 RNA的反转录 | 第40-41页 |
| 3.2.4 AGO2真核表达质粒的构建 | 第41-46页 |
| 3.2.4.1 AGO2的CDS的扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.4.2 PCR产物的回收 | 第42页 |
| 3.2.4.3 LA Taq酶扩增产物连接到p MD18-T Vector上 | 第42-43页 |
| 3.2.4.4 连接产物的转化 | 第43页 |
| 3.2.4.5 菌落鉴定筛选阳性菌落 | 第43-45页 |
| 3.2.4.6 AGO2表达基因连接到p CAGGS-HA载体 | 第45-46页 |
| 3.2.5 细菌的保存 | 第46页 |
| 3.2.6 去内毒素提取质粒 | 第46-48页 |
| 3.2.7 LipofectamineTM2000 Reagent转染细胞 | 第48-49页 |
| 3.2.7.1 质粒的转染 | 第48-49页 |
| 3.2.7.2 si RNA的转染 | 第49页 |
| 3.2.8 细胞总蛋白的抽提与浓度测定 | 第49-50页 |
| 3.2.8.1 细胞总蛋白抽提 | 第49页 |
| 3.2.8.2 蛋白浓度的测定 | 第49-50页 |
| 3.2.9 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western Blotting | 第50-52页 |
| 3.2.9.1 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western Blotting相关试剂的配置 | 第50页 |
| 3.2.9.2 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶制备 | 第50-51页 |
| 3.2.9.3 电泳 | 第51页 |
| 3.2.9.4 转膜 | 第51-52页 |
| 3.2.9.5 封闭与抗体孵育 | 第52页 |
| 3.2.9.6 显色 | 第52页 |
| 3.2.10 流感病毒的增殖 | 第52-53页 |
| 3.2.11 流感病毒的细胞接种 | 第53页 |
| 3.2.12 流感病毒TCID50的测定 | 第53-54页 |
| 3.2.13 荧光定量PCR | 第54页 |
| 3.2.14 仙台病毒的增殖 | 第54-55页 |
| 3.2.15 质粒的构建及质粒提取 | 第55页 |
| 3.2.16 干扰素启动子活性实验 | 第55-56页 |
| 3.2.17 IRF3磷酸化检测实验 | 第56页 |
| 3.2.18 细胞核质分离实验 | 第56-57页 |
| 3.2.19 间接免疫荧光实验 | 第57页 |
| 3.2.20 免疫共沉淀实验 | 第57-58页 |
| 3.2.21 IRF3的DNA结合实验 | 第58-59页 |
| 3.2.22 竞争结合实验 | 第59页 |
| 3.2.23 RNA的核质分离实验 | 第59页 |
| 3.2.24 细胞和流感病毒总RNA的提取与反转录 | 第59-60页 |
| 3.2.25 流感病毒v RNA的检测 | 第60-61页 |
| 4 结果 | 第61-88页 |
| 4.1 AGO2真核表达质粒的构建与表达 | 第61-68页 |
| 4.1.1 AGO2真核表达质粒的成功构建 | 第61-62页 |
| 4.1.2 AGO2真核表达质粒的成功表达 | 第62-63页 |
| 4.1.3 AGO2促进流感病毒的增殖 | 第63-65页 |
| 4.1.4 AGO2抑制干扰素及下游基因的表达 | 第65-68页 |
| 4.2 AGO2抑制IFN-β表达的机制 | 第68-83页 |
| 4.2.1 AGO2抑制IFN-β的m RNA表达水平和启动子活性 | 第68-70页 |
| 4.2.2 AGO2对RIG-I信号通路的影响发生在IRF3或其下游 | 第70-72页 |
| 4.2.3 AGO2不影响IRF3的表达与激活 | 第72-73页 |
| 4.2.4 AGO2不影响IRF3与IFN-β基因启动子的结合 | 第73-74页 |
| 4.2.5 AGO2与IRF3相互作用 | 第74-78页 |
| 4.2.6 AGO2与CBP/p300竞争结合IRF3 | 第78-83页 |
| 4.3 AGO2与H5N1流感病毒之间的互做关系 | 第83-88页 |
| 4.3.1 H5N1影响宿主蛋白AGO2在细胞核的分布 | 第83-85页 |
| 4.3.2 AGO2影响H5N1的v RNA在宿主细胞核的分布 | 第85-88页 |
| 5 讨论 | 第88-92页 |
| 6 总结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简介 | 第112-114页 |
