| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第11-25页 |
| 1.1 蛋白A免疫吸附法简介 | 第11-15页 |
| 1.1.1 蛋白A简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 金属螯合亲和层析纯化蛋白A | 第12-13页 |
| 1.1.3 人体免疫球蛋白(IgG)简介 | 第13-15页 |
| 1.2 蛋白A免疫吸附材料的应用 | 第15-17页 |
| 1.3 特定方向固定蛋白A | 第17-22页 |
| 1.3.1 常用特定方向固定蛋白质的方法 | 第17-19页 |
| 1.3.1.1 表达蛋白连接(EPL)法固定蛋白质 | 第17-18页 |
| 1.3.1.2 蛋白质反式剪切法固定蛋白质 | 第18页 |
| 1.3.1.3 Diels-Alder反应法固定蛋白质 | 第18-19页 |
| 1.3.2 定点固定蛋白A | 第19-20页 |
| 1.3.3 多功能环氧基填料固定蛋白 | 第20-22页 |
| 1.4 本论文立题意义及研究内容 | 第22-25页 |
| 第2章 蛋白A的纯化与浓度测量 | 第25-35页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第26页 |
| 2.3 纯化B3蛋白A | 第26-28页 |
| 2.3.1 钴填料的准备 | 第26-27页 |
| 2.3.2 B3蛋白A的纯化 | 第27-28页 |
| 2.4 测量蛋白A溶液浓度 | 第28-30页 |
| 2.4.1 B3蛋白A-cys(等同于Y3蛋白A)中巯基含量的测定 | 第28-29页 |
| 2.4.1.1 主要溶液及配置方法 | 第28页 |
| 2.4.1.2 标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| 2.4.1.3 样品测定 | 第29页 |
| 2.4.2 蛋白A溶液浓度的测量 | 第29-30页 |
| 2.4.2.1 双缩脲法 | 第29-30页 |
| 2.4.2.2 紫外分光光度法 | 第30页 |
| 2.5 实验结果与讨论 | 第30-34页 |
| 2.5.1 巯基标准曲线 | 第30-31页 |
| 2.5.2 Y3蛋白溶液中巯基随时间变化曲线 | 第31-32页 |
| 2.5.3 双缩脲法测蛋白浓度蛋白标准曲线 | 第32-33页 |
| 2.5.4 紫外分光光度法与双缩脲法测蛋白浓度相关性 | 第33-34页 |
| 2.6 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 氨基环氧基填料固定B3蛋白A | 第35-56页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第36页 |
| 3.3 实验部分 | 第36-42页 |
| 3.3.1 合成多功能环氧基琼脂糖凝胶(氨基环氧基琼脂糖凝胶) | 第36-38页 |
| 3.3.1.1 环氧氯丙烷活化 | 第36-37页 |
| 3.3.1.2 水溶液体系中环氧氯丙烷体积分数对环氧基活化度的影响 | 第37页 |
| 3.3.1.3 非水溶液体系环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶条件优化 | 第37-38页 |
| 3.3.2 合成氨基环氧基琼脂糖凝胶 | 第38-39页 |
| 3.3.2.1 合成氨基环氧基琼脂糖凝胶 | 第38页 |
| 3.3.2.2 测量氨基环氧基填料上的氨基 | 第38-39页 |
| 3.3.3 氨基环氧基填料偶联B3蛋白A | 第39-41页 |
| 3.3.3.1 主要溶液及配置方法 | 第39页 |
| 3.3.3.2 不同pH条件下偶联蛋白A | 第39-40页 |
| 3.3.3.3 不同浓度盐溶液偶联蛋白A | 第40页 |
| 3.3.3.4 不同氨基密度的氨基环氧基填料固定蛋白A | 第40页 |
| 3.3.3.5 不同浓度蛋白A的偶联 | 第40-41页 |
| 3.3.4 蛋白A免疫吸附材料性能检测 | 第41-42页 |
| 3.3.4.1 静态吸附 | 第41页 |
| 3.3.4.2 聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第41页 |
| 3.3.4.3 动态吸附 | 第41-42页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第42-55页 |
| 3.4.1 环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶 | 第42-48页 |
| 3.4.1.1 亚氨基二乙酸法测环氧基密度 | 第42-43页 |
| 3.4.1.2 硫代硫酸钠法测环氧基密度 | 第43-44页 |
| 3.4.1.3 水溶液体系和非水溶液体系活化的比较 | 第44页 |
| 3.4.1.4 DMSO体系ECH体积对活化环氧基密度的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.1.5 DMSO体系NaOH对活化环氧基密度的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.1.6 测量氨基的密度 | 第46-48页 |
| 3.4.2 氨基环氧基填料固定B3蛋白A | 第48-52页 |
| 3.4.2.1 pH对氨基环氧基填料固定蛋白A的效率的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.2.2 离子浓度对氨基环氧基琼脂糖凝胶固定重组蛋白A效率的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.2.3 不同氨基密度的氨基环氧基填料固定蛋白A | 第50-52页 |
| 3.4.3 多功能环氧基蛋白A吸附剂的吸附性能 | 第52-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 第4章 特定方向固定B3蛋白A-CYS | 第56-70页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第56-57页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第57页 |
| 4.3 实验部分 | 第57-61页 |
| 4.3.1 合成马来酰亚胺基琼脂糖凝胶 | 第57-58页 |
| 4.3.2 合成带双键的琼脂糖凝胶 | 第58-59页 |
| 4.3.2.1 溶液的配置 | 第58页 |
| 4.3.2.2 氢氧化钠的浓度对活化度的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.2.3 双键的测量 | 第59页 |
| 4.3.3 马来酰亚胺基填料偶联Y3蛋白A(B3蛋白A-cys) | 第59页 |
| 4.3.3.1 还原B3蛋白A-cys | 第59页 |
| 4.3.3.2 马来酰亚胺基填料偶联Y3蛋白A | 第59页 |
| 4.3.4 带双键填料偶联B3蛋白A-cys | 第59-60页 |
| 4.3.4.1 还原B3蛋白A-cys | 第59-60页 |
| 4.3.4.2 带双键填料偶联B3蛋白A-cys | 第60页 |
| 4.3.5 蛋白A免疫吸附材料性能检测 | 第60-61页 |
| 4.3.5.1 静态吸附 | 第60页 |
| 4.3.5.2 聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第60-61页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第61-69页 |
| 4.4.1 蛋白A起始浓度对偶联量和偶联率的影响 | 第61-65页 |
| 4.4.2 带双键填料偶联B3蛋白A-CYS | 第65-68页 |
| 4.4.2.1 合成带双键的填料 | 第65-66页 |
| 4.4.2.2 氢氧化钠浓度对活化度的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.2.3 烯丙基缩水甘油醚(AGE)对活化度的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.3 硫酸铵对偶联率的影响 | 第68-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-70页 |
| 第5章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
