| 中文摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| 1 G蛋白偶联受体 | 第9-13页 |
| 1.1 G蛋白偶联受体的结构和分类 | 第9-10页 |
| 1.2 G蛋白偶联受体参与的跨膜信号转导系统 | 第10-13页 |
| 2 高通量药物筛选 | 第13-14页 |
| 2.1 高通量药物筛选的基本过程 | 第13-14页 |
| 2.2 高通量药物筛选的基本特点 | 第14页 |
| 3 基于G蛋白偶联受体的高通量药物筛选 | 第14-21页 |
| 3.1 G蛋白偶联受体是重要的高通量药物筛选的作用靶点 | 第14页 |
| 3.2 基于G蛋白偶联受体的高通量药物筛选方法 | 第14-21页 |
| 4 黑素皮质素系统 | 第21-22页 |
| 5 黑素皮质素4受体 | 第22-24页 |
| 5.1 MC4R的结构及生理学功能 | 第22页 |
| 5.2 MC4R参与的细胞内信号转导通路 | 第22-23页 |
| 5.3 MC4R突变体的研究意义 | 第23-24页 |
| 6 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 不同配体对野生型MC4R及4个突变体cAMP信号通路的影响 | 第25-40页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-30页 |
| 2.1 试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2.2 质粒的共转染 | 第27页 |
| 2.3 不同配体作用于HEK293T细胞 | 第27-29页 |
| 2.4 检测HEK293T细胞内cAMP的水平 | 第29-30页 |
| 2.5 数据处理与分析 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-37页 |
| 3.1 cMC4R WT及4个突变体基础活性的检测 | 第30-31页 |
| 3.2 激动剂作用于HEK293T细胞后荧光素酶的检测 | 第31-34页 |
| 3.3 激动剂和拮抗剂共同作用对cMC4R WT的影响 | 第34-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 4.1 响应元件的选择 | 第37页 |
| 4.2 MC4R突变位点及其对功能的影响 | 第37-38页 |
| 4.3 不同配体与MC4R的作用 | 第38-39页 |
| 5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 以鸡黑素皮质素4受体为靶点细胞筛选模型的建立 | 第40-54页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 2 试验方法 | 第41-47页 |
| 2.1 CHO-K1细胞的复苏、培养、传代与铺板 | 第41页 |
| 2.2 稳定细胞株的建立 | 第41-43页 |
| 2.3 RT-PCR验证阳性细胞中目的基因的表达 | 第43-44页 |
| 2.4 优化筛选条件 | 第44-45页 |
| 2.5 评估筛选方法 | 第45-46页 |
| 2.6 检测cMC4R阳性细胞株内源性干扰 | 第46页 |
| 2.7 荧光素酶报告基因检测 | 第46-47页 |
| 2.8 数据处理与分析 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-51页 |
| 3.1 阳性细胞株的筛选和确定 | 第47-48页 |
| 3.2 RT-PCR检测结果 | 第48-49页 |
| 3.3 筛选条件的优化结果 | 第49-50页 |
| 3.4 筛选方法的评估结果 | 第50页 |
| 3.5 鸡MC4R阳性细胞株内源性干扰的检测结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 4.1 报告基因的选择 | 第51-52页 |
| 4.2 基于MC4R cAMP/PKA信号通路细胞筛选模型建立的理论依据 | 第52页 |
| 4.3 基于不同信号通路的药物筛选细胞模型的建立 | 第52-53页 |
| 5 本章小结 | 第53-54页 |
| 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 在读期间发表的文章 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
