| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 猪圆环病毒2型的分子生物学研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 PCV的发现及分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 PCV2的形态结构及理化特征 | 第14页 |
| 1.1.3 PCV2的基因组结构及其编码蛋白 | 第14-17页 |
| 1.1.4 PCV2的基因转录 | 第17页 |
| 1.1.5 PCV2的感染和复制机制 | 第17-18页 |
| 1.2 核定位信号肽的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.2.1 核定位信号肽的定义 | 第19页 |
| 1.2.2 核定位信号肽的分类 | 第19-20页 |
| 1.2.3 经典核定位信号肽进出细胞核的机制 | 第20-21页 |
| 1.2.4 核定位信号肽参与的生物信息调节 | 第21-22页 |
| 1.2.5 核定位信号肽的应用 | 第22-23页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备与鉴定 | 第24-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-27页 |
| 2.1.1 病料、载体、细胞和主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.2 基因扩增及序列分析 | 第25-26页 |
| 2.1.3 重组载体的构建 | 第26页 |
| 2.1.4 重组杆状病毒的制备 | 第26页 |
| 2.1.5 表达产物的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.5.1 Westernblotting检测 | 第26页 |
| 2.1.5.2 间接免疫荧光(IFA)检测 | 第26-27页 |
| 2.1.5.3 质谱鉴定 | 第27页 |
| 2.1.6 Cap蛋白的纯化及VLP结构的鉴定 | 第27页 |
| 2.1.6.1 Cap蛋白的纯化 | 第27页 |
| 2.1.6.2 Cap蛋白VLP结构的电镜检察 | 第27页 |
| 2.1.6.3 Cap蛋白VLP结构的免疫电镜检察 | 第27页 |
| 2.2 结果 | 第27-33页 |
| 2.2.1 PCV2Cap基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.2 PCV2Cap基因的序列分析 | 第28-29页 |
| 2.2.3 重组载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 重组PCV2dCap蛋白的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.5 重组蛋白的IFA检测 | 第31页 |
| 2.2.6 重组蛋白的质谱鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 PCV2dCap蛋白的纯化 | 第32页 |
| 2.2.8 PCV2dCap蛋白VLP结构的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 抗猪圆环病毒2型病毒样颗粒单克隆抗体的制备与鉴定 | 第35-44页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-38页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第36页 |
| 3.1.3 重组蛋白的制备 | 第36-37页 |
| 3.1.3.1 PCV2VLP的表达纯化及检测 | 第36-37页 |
| 3.1.3.2 tCap蛋白的表达纯化及鉴定 | 第37页 |
| 3.1.4 杂交瘤细胞的制备 | 第37页 |
| 3.1.5 单克隆抗体的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.5.1 酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第37页 |
| 3.1.5.2 间接免疫荧光(IFA)试验 | 第37-38页 |
| 3.1.5.3 Westernblotting鉴定 | 第38页 |
| 3.1.5.4 免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第38页 |
| 3.1.5.5 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第38页 |
| 3.2 结果 | 第38-42页 |
| 3.2.1 PCV2VLP的纯化及电镜检测 | 第38-39页 |
| 3.2.2 重组tCap蛋白的表达及纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.3 获得一株针对PCV2Cap蛋白的单克隆抗体 | 第40页 |
| 3.2.4 单克隆抗体的Westernblotting鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.5 1F6特异性识别PCV | 第41-42页 |
| 3.2.6 1F6特异性识别PCV2VLP | 第42页 |
| 3.2.7 单克隆抗体的亚型鉴定结果 | 第42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 NLS通过磷酸化修饰调控PCV2Cap蛋白出核 | 第44-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-51页 |
| 4.1.0 主要生物材料 | 第45页 |
| 4.1.1 主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 4.1.2 基因扩增 | 第46页 |
| 4.1.3 重组载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.1.4 重组杆状病毒的制备 | 第47页 |
| 4.1.5 表达产物的Westernblotting检测 | 第47-48页 |
| 4.1.6 流式拍照实验 | 第48-49页 |
| 4.1.6.1 样品制备 | 第48-49页 |
| 4.1.6.2 细胞染色 | 第49页 |
| 4.1.6.3 样品分析 | 第49页 |
| 4.1.7 激光共聚焦技术 | 第49-50页 |
| 4.1.7.1 样品制备 | 第49-50页 |
| 4.1.7.2 细胞染色 | 第50页 |
| 4.1.7.3 样品分析 | 第50页 |
| 4.1.8 质谱分析 | 第50页 |
| 4.1.9 生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 4.1.10 统计学分析 | 第51页 |
| 4.2 结果 | 第51-59页 |
| 4.2.1 Cap蛋白进入细胞核,然后出核 | 第51-53页 |
| 4.2.2 核定位信号肽(NLS)介导Cap蛋白出核 | 第53-54页 |
| 4.2.3 核定位信号肽(NLS)包含一个磷酸化位点 | 第54-56页 |
| 4.2.4 在Sf9昆虫细胞内,核定位信号肽(NLS)通过磷酸化修饰调节Cap蛋白出核 | 第56-57页 |
| 4.2.5 在PK15细胞内,核定位信号肽(NLS)通过磷酸化修饰介导Cap蛋白出核 | 第57-58页 |
| 4.2.6 在PK15细胞内,Rep和Rep’蛋白不影响Cap蛋白的胞内定位 | 第58-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-62页 |
| 第五章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76页 |
