| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.1 顶复器门原虫Ca~(2+)稳态和储存 | 第13-15页 |
| 1.2 顶复器原虫Ca~(2+)传导与功能 | 第15-16页 |
| 1.3 顶复器原虫Ca~(2+)结合蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 Ca~(2+)功能 | 第17-18页 |
| 1.5 CDPK功能 | 第18-20页 |
| 第2章 柔嫩艾美耳球虫CDPK4互作蛋白的筛选 | 第20-33页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 实验动物与虫株 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验试剂及仪器 | 第21页 |
| 2.2.3 实验所需试剂配制方法 | 第21-22页 |
| 2.2.4 柔嫩艾美耳球虫裂殖子的收集与纯化 | 第22页 |
| 2.2.5 柔嫩艾美耳球虫裂殖子总RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.6 柔嫩艾美耳球虫裂殖子mRNA分离 | 第22页 |
| 2.2.7 柔嫩艾美耳球虫裂殖子dscDNA合成与纯化 | 第22-24页 |
| 2.2.8 酵母感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.9 柔嫩艾美耳球虫裂殖子Y2HcDNA文库的构建 | 第24页 |
| 2.2.10 柔嫩艾美耳球虫裂殖子cDNA文库检测 | 第24-25页 |
| 2.2.11 pGBKT7-EtCDPK4质粒复苏及提取 | 第25页 |
| 2.2.12 Y2H筛选EtCDPK4互作蛋白 | 第25-26页 |
| 2.2.13 回复杂交验证阳性质粒 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-31页 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子的收集与纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.2 柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA提取 | 第28页 |
| 2.3.3 柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子mRNA分离及双链cDNA纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子酵母cDNA文库构建和质量检测 | 第29页 |
| 2.3.5 Y2H初步筛选EtCDPK4互作蛋白 | 第29-30页 |
| 2.3.6 回复杂交验证 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 柔嫩艾美耳球虫CDPK4两个互作蛋白的验证 | 第33-47页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 材料与方法 | 第33-39页 |
| 3.2.1 实验动物、虫株、细胞和质粒 | 第33-34页 |
| 3.2.2 实验试剂及仪器 | 第34页 |
| 3.2.3 实验所用试剂配制方法 | 第34-35页 |
| 3.2.4 柔嫩艾美耳球虫裂殖子、子孢子收集与纯化 | 第35页 |
| 3.2.5 EtSerpin、EtRPAC1及EtCDPK4基因克隆 | 第35-38页 |
| 3.2.6 DF-1细胞复苏与培养 | 第38页 |
| 3.2.7 双分子荧光互补(BiFC)实验 | 第38-39页 |
| 3.2.8 免疫共沉淀(Co-IP)实验 | 第39页 |
| 3.2.9 EtSerpin与EtCDPK4共定位 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-44页 |
| 3.3.1 真核重组质粒pBiFC-VC155-EtCDPK4、pBiFC-VN155-EtSerpin、pBiFC-VN155-EtRPAC1构建 | 第39-40页 |
| 3.3.2 真核重组质粒pcDNA3.1-flag-EtCDPK4、pcDNA3.1-flag-EtRPAC1构建 | 第40-41页 |
| 3.3.3 BiFC验证蛋白互作 | 第41-42页 |
| 3.3.4 Co-IP验证蛋白互作 | 第42-43页 |
| 3.3.5 EtSerpin与EtCDPK4共定位 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第4章 柔嫩艾美耳球虫RPAC1功能初步分析 | 第47-59页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-52页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第47页 |
| 4.2.2 虫株、载体和细胞 | 第47-48页 |
| 4.2.3 实验试剂及仪器 | 第48页 |
| 4.2.4 基因的克隆与序列分析 | 第48页 |
| 4.2.5 重组表达质粒的构建 | 第48-49页 |
| 4.2.6 融合蛋白的表达与分析 | 第49-50页 |
| 4.2.7 融合蛋白的纯化 | 第50页 |
| 4.2.8 融合蛋白多克隆抗体的制备与纯化 | 第50页 |
| 4.2.9 蛋白免疫原性和反应原性检测分析 | 第50-51页 |
| 4.2.10 抗rEtRPAC1多克隆抗体体外抑制分析 | 第51-52页 |
| 4.3 结果 | 第52-57页 |
| 4.3.1 EtRPAC1基因生物信息学分析 | 第52-53页 |
| 4.3.2 原核重组表达质粒的构建 | 第53-54页 |
| 4.3.3 重组蛋白的诱导表达及表达形式分析 | 第54页 |
| 4.3.4 重组蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.5 多克隆抗体的制备与纯化 | 第55页 |
| 4.3.6 重组蛋白免疫原性及反应原性分析 | 第55-56页 |
| 4.3.7 体外抑制实验 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第5章 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
