| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-37页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 嗜热菌的代谢工程改造 | 第15-20页 |
| 1.2.1 嗜热菌的特点 | 第15-18页 |
| 1.2.2 嗜热菌基因操作与其难点 | 第18-20页 |
| 1.3 光学纯乳酸的生物法生产及应用 | 第20-24页 |
| 1.3.1 乳酸的应用 | 第20-22页 |
| 1.3.2 光学纯乳酸的生物方法生产 | 第22-23页 |
| 1.3.3 乳酸生产菌株的改造 | 第23-24页 |
| 1.4 腈水解酶的研究进展及应用 | 第24-32页 |
| 1.4.1 腈水解酶概况 | 第24-25页 |
| 1.4.2 腈水解酶催化机理及应用的影响因素 | 第25-29页 |
| 1.4.3 腈水解酶的克隆与改造 | 第29-30页 |
| 1.4.4 R-扁桃酸 | 第30-32页 |
| 1.5 自组装短肽的特性及在分子设计上的应用 | 第32-34页 |
| 1.5.1 自组装短肽 | 第32页 |
| 1.5.2 自组装短肽在酶改造上的应用 | 第32-34页 |
| 1.6 本课题的目的意义和主要研究内容 | 第34-37页 |
| 1.6.1 目的意义 | 第34页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第34-37页 |
| 第二章 T. aotearoense SCUT27 的代谢分析与改造 | 第37-52页 |
| 2.1 引言 | 第37页 |
| 2.2 材料与方法 | 第37-47页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第37-38页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第38-43页 |
| 2.2.3 敲除载体 pPuKAd 的构建 | 第43页 |
| 2.2.4 E. coli 的培养及转化 | 第43-44页 |
| 2.2.5 T. aotearoense SCUT 27 的培养及电转化 | 第44页 |
| 2.2.6 突变株 LA1002 的 Southern 杂交鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.7 突变株 LA1002 的遗传稳定性分析 | 第45页 |
| 2.2.8 分析方法 | 第45-47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 2.3.1 T. aotearoense SCUT 27 代谢改造设计 | 第47-49页 |
| 2.3.2 乙酸代谢途径阻断突变株 T. aotearoense LA1002 的构建及筛选 | 第49-51页 |
| 2.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 突变株 T. aotearoense LA1002 的发酵特性研究及应用 | 第52-63页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-53页 |
| 3.2.1 菌株 | 第52页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第52页 |
| 3.2.3 T. aotearoense LA1002 在 125 mL 血清瓶中的发酵 | 第52-53页 |
| 3.2.4 T. aotearoense LA1002 在 5-L 发酵罐的发酵方法 | 第53页 |
| 3.2.5 分析方法 | 第53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-62页 |
| 3.3.1 突变株 LA1002 的代谢产物分析 | 第53-56页 |
| 3.3.2 pH 对突变株 LA1002 产乳酸的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 不同碳源对突变株 LA1002 产乳酸的影响 | 第57-59页 |
| 3.3.4 突变株 LA1002 在 5-L 发酵罐水平上产乳酸的研究 | 第59-61页 |
| 3.3.5 突变株 LA1002 生料发酵产乳酸的研究 | 第61-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 腈水解酶的分子设计与改造 | 第63-84页 |
| 4.1 引言 | 第63-64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-71页 |
| 4.2.1 菌株、质粒与引物 | 第64-65页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第65页 |
| 4.2.3 腈水解酶 Nit 及自组装酶聚集 Nit-SEA 的构建 | 第65-68页 |
| 4.2.4 E. coli 的培养、转化及表达 | 第68页 |
| 4.2.5 腈水解酶的纯化方法 | 第68-69页 |
| 4.2.6 细胞超薄切片及 TEM 观察方法 | 第69-70页 |
| 4.2.7 腈水解酶的酶活检测方法 | 第70页 |
| 4.2.8 分析方法 | 第70-71页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第71-83页 |
| 4.3.1 自组装短肽诱导腈水解酶自聚集的设计 | 第71-73页 |
| 4.3.2 表达腈水解酶 Nit 及自组装酶聚集 Nit-SEA 重组菌的构建 | 第73-76页 |
| 4.3.3 腈水解酶 Nit 及自组装酶聚集 Nit-SEA 的表达及纯化 | 第76-79页 |
| 4.3.4 Nit-SEA 在胞内聚集分布情况 | 第79-80页 |
| 4.3.5 腈水解酶 Nit 及自组装酶聚集 Nit-SEA 的酶活分析 | 第80-83页 |
| 4.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 腈水解酶 Nit 和 Nit-SEA 及其固定化酶的酶学特性研究 | 第84-100页 |
| 5.1 引言 | 第84页 |
| 5.2 材料与方法 | 第84-88页 |
| 5.2.1 菌株 | 第84页 |
| 5.2.2 试剂与仪器 | 第84-85页 |
| 5.2.3 腈水解酶 Nit 及 Nit-18A 的固定化及交联方法 | 第85-86页 |
| 5.2.4 腈水解酶 Nit、Nit-SEA 及其固定化酶的酶学特性研究方法 | 第86-87页 |
| 5.2.5 腈水解酶的酶活检测方法 | 第87-88页 |
| 5.2.6 固定化酶重复利用方法 | 第88页 |
| 5.2.7 分析方法 | 第88页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第88-98页 |
| 5.3.1 自组装酶聚集体 Nit-SEA 的催化特性 | 第88-92页 |
| 5.3.2 腈水解酶 Nit 及 Nit-SEA 的固定化 | 第92-94页 |
| 5.3.3 固定化酶 Nit-iSEA 的操作稳定性研究及应用 | 第94-98页 |
| 5.4 本章小结 | 第98-100页 |
| 第六章 腈水解酶 Nit 及 Nit-SEA 的结构表征特性研究 | 第100-120页 |
| 6.1 引言 | 第100-101页 |
| 6.2 材料与方法 | 第101-106页 |
| 6.2.1 菌株 | 第101页 |
| 6.2.2 试剂与仪器 | 第101-102页 |
| 6.2.3 Nit-ELK16 及 Nit-L6KD 的克隆表达 | 第102-104页 |
| 6.2.4 Nit-SEA 的蔗糖密度梯度离心纯化方法 | 第104页 |
| 6.2.5 分子筛定量蛋白分子量方法 | 第104-105页 |
| 6.2.6 腈水解酶 Nit、Nit-SEA 的 TEM 样品制备及观察方法 | 第105页 |
| 6.2.7 腈水解酶 Nit、Nit-SEA 的 Cryo-TEM 样品制备及观察方法 | 第105-106页 |
| 6.2.8 腈水解酶 Nit、Nit-SEA 的 FTIR 光谱学特性分析方法 | 第106页 |
| 6.2.9 腈水解酶 Nit、Nit-SEA 的 XRD 分析方法 | 第106页 |
| 6.2.10 Nit-SEA 的硫磺素 T 染色分析方法 | 第106页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第106-119页 |
| 6.3.1 在线建模及二级结构预测 | 第106-108页 |
| 6.3.2 Nit 为 C 字型结构的六聚体 | 第108-110页 |
| 6.3.3 Nit-SEA 在体外聚集形成纤丝状结构 | 第110-114页 |
| 6.3.4 Nit 与 Nit-SEA 二级结构的分析研究 | 第114-119页 |
| 6.4 本章小结 | 第119-120页 |
| 结论与展望 | 第120-126页 |
| 结论 | 第120-123页 |
| 创新性成果 | 第123-124页 |
| 展望 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-144页 |
| 附录 | 第144-147页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第147-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 附件 | 第151页 |
