| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第15-35页 |
| 1.1 课题研究背景及意义 | 第15页 |
| 1.2 PDE4D研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 PDE4D的生物学结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 PDE4D在发育过程中的作用 | 第17-18页 |
| 1.2.3 PDE4D在疾病中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3 Pde4d与印记基因 | 第19-22页 |
| 1.3.1 基因组印记与Pde4d印记的特点 | 第19-20页 |
| 1.3.2 印记基因与胚胎发育 | 第20-22页 |
| 1.3.3 印记基因与肿瘤发生 | 第22页 |
| 1.4 基因的表观遗传调控因素 | 第22-29页 |
| 1.4.1 DNA甲基化 | 第23-26页 |
| 1.4.2 miRNA | 第26-29页 |
| 1.5 PDE4D参与的细胞生物学行为 | 第29-33页 |
| 1.5.1 细胞增殖 | 第29-30页 |
| 1.5.2 细胞粘附 | 第30-32页 |
| 1.5.3 细胞迁移 | 第32-33页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容及技术路线 | 第33-35页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第33-34页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第34-35页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第35-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 动物与细胞系 | 第35页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第35页 |
| 2.1.3 抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要实验试剂 | 第36页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.6 生物信息学网站与软件 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-44页 |
| 2.2.1 RNA探针制备 | 第38页 |
| 2.2.2 全胚胎RNA原位杂交 | 第38-39页 |
| 2.2.3 组织切片RNA原位杂交 | 第39-40页 |
| 2.2.4 实时定量PCR | 第40页 |
| 2.2.5 甲基化分析 | 第40-42页 |
| 2.2.6 脂质体转染细胞与稳定转染细胞系的建立 | 第42页 |
| 2.2.7 细胞内基因组去甲基化处理 | 第42-43页 |
| 2.2.8 Pde4d 3′UTR载体的构建及双荧光素酶报告基因检测 | 第43页 |
| 2.2.9 Western Blot | 第43页 |
| 2.2.10 细胞免疫荧光 | 第43-44页 |
| 2.2.11 细胞周期分析 | 第44页 |
| 2.2.12 统计学分析 | 第44页 |
| 2.3 本章小结 | 第44-45页 |
| 第3章 Pde4d基因座的印记特点 | 第45-56页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 Pde4d基因座的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 3.3 Pde4d基因座在小鼠胚胎发育过程中的印记特点 | 第47-53页 |
| 3.3.1 Pde4d在胚胎发育中的印记特点 | 第48-49页 |
| 3.3.2 AK046832在胚胎发育中的印记特点 | 第49-51页 |
| 3.3.3 miR-1904在胚胎发育中的印记特点 | 第51-53页 |
| 3.4 CGI1和CGI2的甲基化分析 | 第53-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第4章 Pde4d在小鼠胚胎发育过程中的表达模式 | 第56-70页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 Pde4d在小鼠胚胎发育过程中的时空表达模式 | 第56-66页 |
| 4.2.1 Pde4d在胚胎发育中的定量分析 | 第56-58页 |
| 4.2.2 Pde4d在胚胎发育中后期的表达谱分析 | 第58-66页 |
| 4.3 Pde4d在小鼠胎盘发育过程中的时空表达模式 | 第66-68页 |
| 4.3.1 Pde4d在小鼠胎盘发育中的定量分析 | 第66-67页 |
| 4.3.2 Pde4d在小鼠胎盘发育中的定位分析 | 第67-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-70页 |
| 第5章 Pde4d基因的表观遗传调控方式 | 第70-86页 |
| 5.1 引言 | 第70页 |
| 5.2 Pde4d启动子区预测 | 第70-71页 |
| 5.3 Pde4d启动子区甲基化模式分析 | 第71-79页 |
| 5.3.1 启动子区组织特异性的DNA甲基化 | 第71-73页 |
| 5.3.2 差异甲基化与组织特异性表达的关系 | 第73-74页 |
| 5.3.3 启动子区发育阶段特异性的DNA甲基化 | 第74-75页 |
| 5.3.4 差异甲基化与阶段特异性表达的关系 | 第75-76页 |
| 5.3.5 甲基转移酶抑制剂对Pde4d表达的影响 | 第76-79页 |
| 5.4 内含子miR-1904与主基因Pde4d的调控关系 | 第79-84页 |
| 5.4.1 miR-1904的结构特征与靶基因预测及鉴定 | 第79-80页 |
| 5.4.2 miR-1904对Pde4d表达的影响 | 第80-82页 |
| 5.4.3 Pde4d对miR-1904表达的影响 | 第82-84页 |
| 5.5 本章小结 | 第84-86页 |
| 第6章 PDE4D对细胞增殖和迁移的影响 | 第86-104页 |
| 6.1 引言 | 第86页 |
| 6.2 PDE4D稳定过量表达细胞系的建立 | 第86-89页 |
| 6.2.1 PDE4D在MS-K与MS-5细胞中的表达分析 | 第86-87页 |
| 6.2.2 PDE4D稳定过量表达MS-K细胞系的建立 | 第87-89页 |
| 6.3 过表达PDE4D对MS-K细胞增殖能力的影响 | 第89-93页 |
| 6.3.1 PDE4D对MS-K细胞增殖与克隆形成的影响 | 第89-91页 |
| 6.3.2 PDE4D对MS-K细胞周期的影响 | 第91-93页 |
| 6.4 过表达PDE4D对MS-K细胞迁移能力的影响 | 第93-99页 |
| 6.4.1 PDE4D对MS-K细胞迁移能力的影响 | 第93-97页 |
| 6.4.2 PDE4D对细胞骨架系统的影响 | 第97-99页 |
| 6.5 PDE4D对细胞增殖和迁移相关基因的影响 | 第99-100页 |
| 6.6 PDE4D对MS-K细胞体内移植后的影响 | 第100-103页 |
| 6.7 本章小结 | 第103-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-122页 |
| 附录Ⅰ | 第122-124页 |
| 附录Ⅱ | 第124-126页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第126-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 个人简历 | 第130页 |
