| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第9-13页 |
| 第一部分 Dhtkd1 基因点突变敲入小鼠模型的表型分析 | 第13-47页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 1.实验材料 | 第16-18页 |
| 1.1 实验动物 | 第16页 |
| 1.2 实验用试剂 | 第16-17页 |
| 1.2.1 分子生物学试剂 | 第16页 |
| 1.2.2 常用化学试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 常用试剂配方 | 第17页 |
| 1.4 主要实验仪器与设备 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-27页 |
| 2.1 基因敲入小鼠模型的繁育 | 第18页 |
| 2.2 小鼠基因型的鉴定 | 第18-19页 |
| 2.2.1 鼠尾基因组DNA提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 小鼠基因型鉴定 | 第19页 |
| 2.3 Dhtkd1基因在小鼠中的表达谱分析 | 第19-21页 |
| 2.3.1 组织总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.3.2 RNA反转录为cDNA | 第20-21页 |
| 2.3.3 实时定量荧光PCR检测Dhtkd1的表达 | 第21页 |
| 2.4 三种基因型小鼠中Dhtkd1基因的表达量分析 | 第21-23页 |
| 2.4.1 Real Time PCR | 第22页 |
| 2.4.2 Western Blot | 第22-23页 |
| 2.5 三种基因型小鼠肌肉组织中线粒体含量分析 | 第23页 |
| 2.6 Dhtkd1高表达组织的石蜡切片制备 | 第23-24页 |
| 2.7 坐骨神经组织的透射电镜切片制作及观察 | 第24-25页 |
| 2.8 8月龄小鼠肌肉组织冰冻切片制作及酶学染色 | 第25页 |
| 2.9 12月龄小鼠行为学实验 | 第25-27页 |
| 2.9.1 足爪热痛实验 | 第26页 |
| 2.9.2 跑步机实验 | 第26页 |
| 2.9.3 代谢笼实验 | 第26-27页 |
| 3. 实验结果 | 第27-39页 |
| 3.1 新生小鼠的出生情况统计 | 第27页 |
| 3.2 小鼠基因型鉴定及Dhtkd1表达谱分析 | 第27-29页 |
| 3.3 Dhtkd1基因在三种基因型小鼠中的表达量分析 | 第29-30页 |
| 3.4 三种基因型小鼠的线粒体含量分析 | 第30-31页 |
| 3.5 Dhtkd1基因高表达组织的石蜡切片及HE染色 | 第31页 |
| 3.6 坐骨神经的透射电镜及病理学分析 | 第31-33页 |
| 3.7 腓肠肌冰冻切片病理学分析 | 第33-35页 |
| 3.8 肌肉组织的透射电镜及病理学分析 | 第35-36页 |
| 3.9 行为学实验分析 | 第36-39页 |
| 3.9.1 足爪热痛实验 | 第36-37页 |
| 3.9.2 跑步机实验 | 第37页 |
| 3.9.3 代谢笼实验 | 第37-39页 |
| 4.讨论 | 第39-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 第二部分 遗传性蛋白C缺陷症致病机制的研究 | 第47-68页 |
| 前言 | 第47-49页 |
| 1.实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 研究对象 | 第49页 |
| 1.2 实验试剂 | 第49页 |
| 1.3 引物设计 | 第49页 |
| 1.4 常用实验试剂的配制 | 第49页 |
| 1.5 实验设备 | 第49-50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-56页 |
| 2.1 先证者临床检查 | 第50页 |
| 2.2 致病基因的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3 野生型EGFP-PROC表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 2.3.1 在PROC的cDNA序列两侧加上限制性内切酶位点 | 第51页 |
| 2.3.2 PCR产物纯化回收 | 第51页 |
| 2.3.3 双酶切消化 | 第51页 |
| 2.3.4 将酶切产物分别电泳鉴定并纯化回收 | 第51-52页 |
| 2.3.5 用T4 DNA连接酶连接 | 第52页 |
| 2.3.6 测序重组载体 | 第52-53页 |
| 2.4 定点突变法构建含突变位点的载体 | 第53页 |
| 2.5 HEK293细胞的复苏、培养与冻存 | 第53-54页 |
| 2.6 质粒转染 | 第54-55页 |
| 2.7 细胞总蛋白的提取 | 第55页 |
| 2.8 外源基因的表达检测 | 第55页 |
| 2.9 通过RNA干扰抑制nonsense-mediated mRNA decay（NMD） 途径 | 第55-56页 |
| 2.10 NMD途径抑制后检测突变载体的表达 | 第56页 |
| 3.结果 | 第56-62页 |
| 3.1 患者临床诊断结果 | 第56页 |
| 3.2 两个家系 | 第56-57页 |
| 3.3 突变基因的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.4 野生型及突变EGFP-PROC重组表达质粒的鉴定 | 第58页 |
| 3.5 重组质粒的表达检测 | 第58-61页 |
| 3.6 NMD途径的抑制 | 第61页 |
| 3.7 NMD途径抑制后无义突变质粒的拯救 | 第61-62页 |
| 4.讨论 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 研究生期间发表和待发表论文 | 第71页 |
