| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 乳糖酶简介 | 第12-14页 |
| 1.2 用于乳糖酶生产的微生物重组系统 | 第14-16页 |
| 1.2.1 曲霉乳糖酶的生产 | 第14-15页 |
| 1.2.2 克鲁维属酵母乳糖酶的生产 | 第15页 |
| 1.2.3 重组细菌乳糖酶的表达 | 第15-16页 |
| 1.3 重组乳糖酶的应用 | 第16-18页 |
| 1.3.1 牛奶中乳糖的水解 | 第17页 |
| 1.3.2 乳清的生物降解 | 第17页 |
| 1.3.3 生物传感器和融合蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3.4 乳糖酶的其他应用及发展趋势 | 第18页 |
| 1.4 酵母菌的葡萄糖阻遏作用 | 第18-19页 |
| 1.5 LAC9p1 转录激活蛋白 | 第19-20页 |
| 1.6 本论文研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 K. marxianus kmi 菌株 MIG1 基因的敲除 | 第21-32页 |
| 2.0 引言 | 第21页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.3 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 质粒的提取、酶切及转化酵母 DNA 片段的回收 | 第23页 |
| 2.2.2 kmi 菌株感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 kmi 菌株的转化与筛选 | 第24页 |
| 2.2.4 乳糖酶活力的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 MIG1 基因敲除菌株的验证 | 第25-26页 |
| 2.2.6 实时荧光定量 PCR | 第26-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.3.1 提取、酶切重组质粒和回收用于转化酵母的 DNA 片段 | 第27页 |
| 2.3.2 kmi 菌株的转化与筛选 | 第27-28页 |
| 2.3.3 MIG1 基因敲除菌株的验证 | 第28-30页 |
| 2.3.4 实时荧光定量 PCR | 第30-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32页 |
| 第三章 葡萄糖解阻遏突变株乳糖酶的发酵生产 | 第32-38页 |
| 3.0 引言 | 第32-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 培养基 | 第33页 |
| 3.1.3 试剂 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 MIG1 基因敲除菌株 kmi-17 的摇瓶发酵 | 第34页 |
| 3.2.2 MIG1 基因敲除菌株 kmi-17 的 10-L 发酵罐发酵 | 第34页 |
| 3.2.3 乳糖含量测定 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果及讨论 | 第35-37页 |
| 3.3.1 MIG1 基因敲除菌株 kmi-17 的摇瓶发酵 | 第35-36页 |
| 3.3.2 MIG1 基因敲除菌株 kmi-17 的 10-L 发酵罐发酵 | 第36-37页 |
| 3.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第四章 乳糖酶转录激活蛋白基因 LAC9p1 的敲除及超表达对乳糖酶合成及其基因表达的影响 | 第38-57页 |
| 4.0 引言 | 第38页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1 实验菌株及质粒 | 第38-39页 |
| 4.1.2 培养基 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 4.2.1 kmi 菌株基因组 DNA 的提取 | 第39页 |
| 4.2.2 LAC9p1 基因敲除载体的构建 | 第39-42页 |
| 4.2.3 质粒的提取、酶切及回收转化所需片段 | 第42-43页 |
| 4.2.4 kmi 菌株感受态的制备和转化 | 第43页 |
| 4.2.5 LAC9p1 基因敲除菌株的验证 | 第43页 |
| 4.2.6 LAC9p1 基因敲除菌株乳糖酶活力的测定 | 第43页 |
| 4.2.7 实时荧光定量 PCR | 第43页 |
| 4.2.8 LAC9p1 基因表达载体的构建 | 第43-46页 |
| 4.2.10 kmi-17 菌株感受态的制备 | 第46页 |
| 4.2.11 kmi-17 菌株的转化与筛选 | 第46页 |
| 4.2.12 实时荧光定量 PCR | 第46页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第46-56页 |
| 4.3.1 kmi 菌株基因组 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| 4.3.2 LAC9p1 基因敲除载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.3.3 质粒的提取、酶切及回收转化所需片段 | 第48-49页 |
| 4.3.4 kmi 菌株转化和筛选 | 第49-50页 |
| 4.3.5 LAC9p1 基因敲除菌株的验证 | 第50-51页 |
| 4.3.6 LAC9p1 基因敲除菌株乳糖酶产量的测定及荧光定量 PCR 结果 | 第51-52页 |
| 4.3.7 LAC9p1 基因表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.3.8 kmi-17 菌株的转化和筛选 | 第54-55页 |
| 4.3.9 实时荧光定量 PCR | 第55-56页 |
| 4.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 LAC9p1 基因超表达菌株乳糖酶的发酵生产 | 第57-62页 |
| 5.0 引言 | 第57-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第58页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第58页 |
| 5.1.2 培养基 | 第58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58-59页 |
| 5.2.1 kml-1 菌株的摇瓶发酵 | 第58-59页 |
| 5.2.2 kml-1 菌株的 10-L 发酵罐发酵 | 第59页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第59-61页 |
| 5.3.1 kml-1 菌株的摇瓶发酵 | 第59-60页 |
| 5.3.2 kml-1 菌株的 10-L 发酵罐发酵 | 第60-61页 |
| 5.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 论文总结及创新点 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录：英文缩写符号及中英文对照表 | 第68-69页 |
| 个人简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
