| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·RNA 沉默 | 第12-13页 |
| ·参与RNA 沉默的重要的酶 | 第13-15页 |
| ·Dicer | 第13-14页 |
| ·Drosha 与微处理复合物 | 第14页 |
| ·Argonaute | 第14-15页 |
| ·siRNA 的产生及其作用机制 | 第15-17页 |
| ·dsRNA 的产生 | 第15页 |
| ·siRNA 的产生 | 第15-16页 |
| ·m RNA 的降解 | 第16页 |
| ·siRNA 策略在植物抗病毒中的应用 | 第16-17页 |
| ·miRNA 的产生及其作用机制 | 第17-20页 |
| ·miRNA 的功能 | 第19页 |
| ·amiRNA 策略及其应用 | 第19-20页 |
| ·amiRNA 策略在植物抗病毒方面的研究进展 | 第20页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-55页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·植物材料培养 | 第22页 |
| ·菌株、质粒与毒源 | 第22页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第22-23页 |
| ·PCR 引物 | 第23-26页 |
| ·实验方法 | 第26-55页 |
| ·拟南芥总DNA 的提取 | 第26页 |
| ·pre-miRNA 的扩增 | 第26-28页 |
| ·amiRNA 的筛选 | 第28-29页 |
| ·pre-miRNA 的改造 | 第29-33页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第33-36页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的PCR 鉴定 | 第37-42页 |
| ·转基因植株中靶基因剪切位点的验证 | 第42页 |
| ·PCR 目的片段的回收 | 第42页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第43页 |
| ·质粒的提取 | 第43-46页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第47页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第47-49页 |
| ·植物小RNA 的提取 | 第49-50页 |
| ·探针的制备 | 第50-51页 |
| ·杂交 | 第51-52页 |
| ·荧光定量PCR | 第52页 |
| ·5'RLM-RACE | 第52-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-90页 |
| ·拟南芥pre-miRNA 的扩增 | 第55-58页 |
| ·拟南芥pre-miR159a 的扩增 | 第55-56页 |
| ·拟南芥pre-miR167b 的扩增 | 第56-57页 |
| ·拟南芥pre-miR171a 的扩增 | 第57-58页 |
| ·amiRNA 的筛选 | 第58页 |
| ·pre-miRNA 的改造 | 第58-62页 |
| ·pre-miR159a 的改造 | 第58-60页 |
| ·pre-miR167b 的改造 | 第60-61页 |
| ·pre-miR171a 的改造 | 第61-62页 |
| ·表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·pB1121 的改造 | 第62-63页 |
| ·构建各类表达载体 | 第63-64页 |
| ·再生植株的获得 | 第64-65页 |
| ·T_1 代转基因植株的amiRNA 的Northern blot | 第65-66页 |
| ·转基因植株的抗性分析 | 第66-85页 |
| ·T_1 转基因植株对SD1-PVY~N 的抗病性分析 | 第66-76页 |
| ·T_1 代转基因植株对FX21-PVX 的抗病性分析 | 第76-82页 |
| ·转基因植株广谱抗性的鉴定 | 第82-85页 |
| ·双抗转基因植株的获得 | 第85-90页 |
| ·双抗表达载体的构建以及再生植株的获得 | 第85-87页 |
| ·双抗转基因植株的抗病性分析 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-101页 |
| 附录 | 第101-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第105页 |
