| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 综述部分 | 第12-21页 |
| 第一章 IFN-γ研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1 前言 | 第12-13页 |
| 1.2 IFN-γ的分子生物学研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 IFN-γ结构 | 第13页 |
| 1.2.2 IFN-γ受体 | 第13-14页 |
| 1.2.3 IFN-γ的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.3 干扰素的理化性质及免疫学活性 | 第15-18页 |
| 1.3.1 干扰素的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.3.2 干扰素的免疫学活性 | 第16-18页 |
| 1.4 干扰素的兽医临床应用 | 第18-20页 |
| 1.4.1 干扰素应用于病毒病的治疗 | 第18-19页 |
| 1.4.2 干扰素应用于细菌性疾病的治疗 | 第19页 |
| 1.4.3 IFN-γ的其他应用 | 第19-20页 |
| 1.5 山羊 IFN-γ研究进展 | 第20-21页 |
| 试验研究 | 第21-46页 |
| 第二章 山羊 IFN-γ基因的克隆及序列分析 | 第21-29页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 主要溶液配方 | 第21-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.2 山羊外周血淋巴细胞分离培养 | 第23页 |
| 2.2.3 淋巴细胞总 RNA 提取 | 第23页 |
| 2.2.4 cDNA 的合成和 PCR 扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.5 克隆载体构建 | 第24-25页 |
| 2.2.6 目的基因序列分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 目的基因 RT-PCR 扩增结果 | 第25页 |
| 2.3.2 重组质粒 PCR 鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.3.3 克隆质粒酶切鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.4 测序结果分析及 IFN-γ序列分析 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 山羊 IFN-γ基因原核表达 | 第29-40页 |
| 3.1 材料 | 第29-31页 |
| 3.1.1 菌种和载体 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 3.1.4 主要溶液配方 | 第29-31页 |
| 3.2 方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第31-32页 |
| 3.2.2 目的片段克隆 | 第32页 |
| 3.2.3 原核表达载体的构建 | 第32页 |
| 3.2.4 重组蛋白的诱导表达及 Western-blot 检测 | 第32-34页 |
| 3.2.5 重组蛋白纯化 | 第34页 |
| 3.2.6 多克隆抗体制备 | 第34页 |
| 3.2.7 抗山羊 IFN-γ多抗效价的 ELISA 测定 | 第34页 |
| 3.3 结果 | 第34-38页 |
| 3.3.1 目的基因 PCR 结果 | 第34页 |
| 3.3.2 IFN-γ重组质粒 PCR 结果 | 第34-35页 |
| 3.3.3 IFN-γ重组质粒双酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.3.4 蛋白表达诱导条件优化结果 | 第36页 |
| 3.3.5 重组蛋白 Western-blot 分析结果 | 第36-37页 |
| 3.3.6 重组蛋白纯化结果 | 第37-38页 |
| 3.3.7 兔抗重组山羊 IFN-γ蛋白多克隆抗体效价测定 | 第38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 重组山羊 IFN-γ抗 ORFV 活性鉴定 | 第40-46页 |
| 4.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.1 试验动物、细胞及毒株 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 4.1.4 主要试剂配方 | 第40页 |
| 4.2 方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1 IFN-γ抗 ORFV 在山羊胎儿成纤维细胞上的增殖 | 第40-41页 |
| 4.2.2 ORFV 毒价测定 | 第41页 |
| 4.2.3 ORFV DNA 的提取 | 第41页 |
| 4.2.4 ORFV DNA 的 Q-PCR 反应及标准曲线的建立 | 第41页 |
| 4.2.5 重组 IFN-γ抗 ORFV 试验 | 第41页 |
| 4.2.6 数据分析 | 第41页 |
| 4.3 结果 | 第41-44页 |
| 4.3.1 ORFV 毒价测定 | 第41-42页 |
| 4.3.2 标准曲线建立结果 | 第42页 |
| 4.3.3 重组 IFN-γ抗 ORFV 增殖结果 | 第42-43页 |
| 4.3.4 重组 IFN-γ抗 ORFV 效价测定结果 | 第43-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 4.5 小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 缩略词 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
