| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-23页 |
| 第一章 MiRNA 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 MiRNA 的发现历史 | 第12页 |
| 1.2 MiRNA 的生物合成，预测鉴定及靶基因筛选 | 第12-15页 |
| 1.2.1 MiRNA 的生物合成 | 第12-13页 |
| 1.2.2 MiRNA 的预测及鉴定 | 第13-14页 |
| 1.2.3 MiRNA 靶基因的筛选 | 第14-15页 |
| 1.3 MiRNA 在各领域的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 MiRNA 对增殖分化（prolifeciation & differentation）的影响 | 第15-16页 |
| 1.3.2 MiRNA 在免疫（immunization）调节中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 MiRNA 在癌症（cancer）及凋亡（apoptosis）过程中的作用 | 第17页 |
| 1.3.4 MiRNA 在代谢（metabolism）调节中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4 MiRNA 研究展望 | 第18-20页 |
| 第二章 MiR-15a/b 研究进展 | 第20-22页 |
| 2.1 MiR-15a/b 家族简介及其结构 | 第20页 |
| 2.2 MiR-15a/b 的研究进展 | 第20-21页 |
| 2.3 MiR-15a/b 与代谢相关的研究进展 | 第21-22页 |
| 第三章 FoxO1 研究进展 | 第22-23页 |
| 3.1 FoxO1 的简介 | 第22页 |
| 3.2 FoxO1 对脂肪分化的影响 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验研究 | 第23-59页 |
| 第四章 MiR-15a/b 的保守性分析及表达谱的确定 | 第23-27页 |
| 4.1 实验材料 | 第23页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第23页 |
| 4.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 4.2.1 数据库检索 miR-15a/b 保守型 | 第23页 |
| 4.2.2 猪原代脂肪细胞的分离培养 | 第23页 |
| 4.2.3 猪原代脂肪细胞的诱导分化 | 第23-24页 |
| 4.2.4 总 RNA 的提取 | 第24页 |
| 4.2.5 RNA 的反转录 | 第24页 |
| 4.2.6 实时定量 | 第24-25页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第25页 |
| 4.3 结果与分析 | 第25-26页 |
| 4.3.1 生物信息学分析结果 | 第25-26页 |
| 4.3.2 MiR-15a/b 在猪原代脂肪细胞成脂分化过程中的表达谱 | 第26页 |
| 4.4 讨论 | 第26-27页 |
| 第五章 腺病毒构建及侵染效果 | 第27-40页 |
| 5.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 5.1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第27-28页 |
| 5.1.2 工具酶和其它试剂 | 第28-29页 |
| 5.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 5.2.1 设计 miR-15a/b 扩增引物 | 第29页 |
| 5.2.2 组织总 RNA 提取 | 第29-30页 |
| 5.2.3 RNA 反转录 cDNA | 第30页 |
| 5.2.4 cDNA 扩增 Pri-miR-15a/b 基因 | 第30页 |
| 5.2.5 DNA 片段的回收 | 第30页 |
| 5.2.6 DH5α感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 5.2.7 质粒转化 DH5α感受态细胞 | 第31页 |
| 5.2.8 质粒的小量提取 | 第31页 |
| 5.2.9 穿梭质粒 pAdTrack-CMV-Pri-miR-15a/b 载体的构建 | 第31-32页 |
| 5.2.10 重组质粒 pAd-Pri-miR-15a/b 的构建 | 第32-34页 |
| 5.2.11 pAd-Pri-miR-15a/b 的扩繁、大量提取、线性化及纯化 | 第34-35页 |
| 5.2.12 腺病毒包装、扩繁、纯化及毒力检测 | 第35-36页 |
| 5.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 5.3.1 Pri-miR-15a/b 扩增结果 | 第36页 |
| 5.3.2 T 载体连接结果 | 第36页 |
| 5.3.3 穿梭质粒鉴定结果 | 第36-37页 |
| 5.3.4 重组质粒鉴定结果 | 第37页 |
| 5.3.5 腺病毒包装结果 | 第37-38页 |
| 5.3.6 腺病毒 pAd-miR-15a/b 的扩繁 | 第38-39页 |
| 5.3.7 腺病毒 pAd-miR-15a/b 的毒力测定 | 第39页 |
| 5.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第六章 腺病毒 pAd-miR-15a/b 侵染猪原代脂肪细胞 | 第40-46页 |
| 6.1 实验材料 | 第40页 |
| 6.1.1 实验动物及细胞 | 第40页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 6.2 试验方法 | 第40-43页 |
| 6.2.1 猪原代脂肪细胞分离步骤 | 第40页 |
| 6.2.2 腺病毒侵染猪原代脂肪细胞及其诱导分化 | 第40-41页 |
| 6.2.3 猪前体脂肪细胞分化过程中成脂相关基因的 mRNA 及蛋白的检测 | 第41-42页 |
| 6.2.4 油红 O 检测细胞内脂滴含量 | 第42-43页 |
| 6.2.5 数据分析 | 第43页 |
| 6.3 结果与分析 | 第43-45页 |
| 6.3.1 腺病毒侵染效果及 miR-15a/b 超表达 | 第43-44页 |
| 6.3.2 油红 O 染色结果 | 第44-45页 |
| 6.3.3 实时定量及 WB 实验结果 | 第45页 |
| 6.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第七章 MiR-15a/b 靶基因的筛选及潜在靶基因表达量的检测 | 第46-52页 |
| 7.1 实验材料 | 第46页 |
| 7.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 7.2.1 生物信息学分析筛选靶基因 | 第46页 |
| 7.2.2 检测候选靶基因的 mRNA 表达水平 | 第46-47页 |
| 7.2.3 检测候选靶基因的蛋白表达水平 | 第47页 |
| 7.2.4 数据分析 | 第47-48页 |
| 7.3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 7.3.1 靶基因筛选结果 | 第48-50页 |
| 7.3.2 候选靶基因 mRNA 表达量的检测 | 第50-51页 |
| 7.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第八章 双萤光素酶报告分析鉴定 miR-15a/b 靶基因 | 第52-59页 |
| 8.1 实验材料 | 第52页 |
| 8.2 试验方法 | 第52-56页 |
| 8.2.1 双萤光素酶载体 psiCHECK-2-IRS1 的构建 | 第52-53页 |
| 8.2.2 双萤光素酶载体 psiCHECK-2- FoxO1 的构建 | 第53-55页 |
| 8.2.3 双萤光素酶突变载体 psiCHECK-2-FoxO1-M 的构建 | 第55-56页 |
| 8.2.4 双荧光素酶检测 | 第56页 |
| 8.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 8.3.1 载体 psiCHECK-2-IRS1 的构建及双萤光素酶检测结果 | 第56-57页 |
| 8.3.2 载体 psiCHECK-2-FoxO1 和 psiCHECK-2-FoxO1-M 的构建及双萤光素酶检测结果 | 第57-58页 |
| 8.4 讨论 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59页 |
| 创新点 | 第59页 |
| 进一步研究内容 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
