| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 食用菌子实体概述 | 第10-11页 |
| 1.2 食用菌子实体发育过程的研究 | 第11-13页 |
| 1.2.1 子实体发育过程中环境因子的影响研究 | 第11页 |
| 1.2.2 子实体发育的生理生化研究 | 第11-13页 |
| 1.3 食用菌功能基因的研究 | 第13-16页 |
| 1.3.1 交配型基因的研究 | 第13-14页 |
| 1.3.2 子实体发育基因的研究 | 第14-15页 |
| 1.3.3 平菇子实体发育基因的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 食用菌遗传转化研究 | 第16-18页 |
| 1.4.1 遗传转化方法研究 | 第16页 |
| 1.4.2 平菇遗传转化的研究 | 第16-18页 |
| 第二章 引言 | 第18-20页 |
| 2.1 研究依据及意义 | 第18-19页 |
| 2.2 实验技术路线 | 第19-20页 |
| 第三章 平菇fst3基因的克隆与生物信息学分析 | 第20-47页 |
| 3.1 材料和方法 | 第20-30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 3.1.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 3.1.1.2 培养基的配制 | 第20页 |
| 3.1.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 3.1.1.4 仪器 | 第21页 |
| 3.1.2 基因fst3保守区片段的获得 | 第21-25页 |
| 3.1.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 3.1.2.2 平菇菌丝总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 3.1.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第22-23页 |
| 3.1.2.4 基因fst3的PCR扩增 | 第23页 |
| 3.1.2.5 PCR产物胶回收纯化 | 第23-24页 |
| 3.1.2.6 PCR回收产物与p MD19 simple T载体连接 | 第24页 |
| 3.1.2.7 连接产物转化感受态细胞 | 第24-25页 |
| 3.1.2.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第25页 |
| 3.1.2.9 序列的分析 | 第25页 |
| 3.1.3 利用RACE技术克隆fst33’端和 5’端 | 第25-28页 |
| 3.1.3.1 引物的设计合成 | 第25-26页 |
| 3.1.3.2 平菇菌丝总RNA的提取 | 第26页 |
| 3.1.3.3 3’端和 5’端第一链c DNA合成 | 第26页 |
| 3.1.3.4 fst3基因 3’端的克隆 | 第26-27页 |
| 3.1.3.5 fst3基因 5’端的克隆 | 第27-28页 |
| 3.1.3.6 序列的分析 | 第28页 |
| 3.1.4 平菇转录因子基因fst3全长c DNA的克隆 | 第28-30页 |
| 3.1.4.1 平菇转录因子基因fst3全长c DNA的引物设计 | 第28-29页 |
| 3.1.4.2 平菇菌丝总RNA的提取 | 第29页 |
| 3.1.4.3 cDNA第一条链的合成 | 第29页 |
| 3.1.4.4 fst3基因c DNA全长扩增及纯化 | 第29页 |
| 3.1.4.5 PCR回收产物与p MD19 simple T载体连接 | 第29页 |
| 3.1.4.6 连接产物转化感受态细胞 | 第29页 |
| 3.1.4.7 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第29页 |
| 3.1.4.8 序列的分析 | 第29-30页 |
| 3.1.5 fst3基因c DNA全长生物信息学分析 | 第30页 |
| 3.2 结果与分析 | 第30-46页 |
| 3.2.1 fst3保守区片段的克隆与测序 | 第30-34页 |
| 3.2.1.1 基因fst3的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.1.2 基因fst3的序列分析 | 第31-34页 |
| 3.2.3 RACE技术克隆fst33’端和 5’端 | 第34-38页 |
| 3.2.3.1 fst3基因 3’端的克隆结果 | 第34-35页 |
| 3.2.3.2 fst3基因 5’端的克隆结果 | 第35-38页 |
| 3.2.4 fst3基因全长序列的拼接与分析 | 第38-43页 |
| 3.2.5 全长序列的验证 | 第43页 |
| 3.2.6 平菇fst3基因生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.3 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 fst3表达模式分析与原核表达 | 第47-56页 |
| 4.1 材料和方法 | 第47-52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1.1 菌株和质粒 | 第47页 |
| 4.1.1.2 培养基的配制 | 第47页 |
| 4.1.1.3 主要试剂 | 第47页 |
| 4.1.1.4 仪器 | 第47页 |
| 4.1.1.5 试验中主要溶液的配制 | 第47-48页 |
| 4.1.2 平菇fst3基因表达模式分析 | 第48-50页 |
| 4.1.2.1 培养平菇新 831 | 第48页 |
| 4.1.2.2 提取平菇总RNA | 第48页 |
| 4.1.2.3 c DNA第一条链的合成 | 第48页 |
| 4.1.2.4 半定量RT-PCR | 第48-50页 |
| 4.1.3 表达载体p EASY-fst3的构建 | 第50-51页 |
| 4.1.3.1 fst3基因ORF引物的设计 | 第50页 |
| 4.1.3.2 ORF的PCR扩增及纯化 | 第50页 |
| 4.1.3.3 PCR回收产物与p EASY-E2原核表达载体连接 | 第50页 |
| 4.1.3.4 连接产物转化感受态细胞 | 第50-51页 |
| 4.1.3.5 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第51页 |
| 4.1.3.6 序列的分析 | 第51页 |
| 4.1.4 原核表达菌株的构建及诱导表达 | 第51-52页 |
| 4.1.4.1 表达载体p EASY-fst3转化E.coli BL21 | 第51页 |
| 4.1.4.2 诱导表达 | 第51页 |
| 4.1.4.3 蛋白SDS-PAGE | 第51-52页 |
| 4.2 结果与分析 | 第52-55页 |
| 4.2.1 平菇fst3基因表达模式分析 | 第52-53页 |
| 4.2.2 原核表达载体p EASY-fst3的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.3 蛋白诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| 4.3 本章小结 | 第55-56页 |
| 第五章 平菇fst3过表达载体和反义沉默载体的构建 | 第56-67页 |
| 5.1 材料和方法 | 第56-59页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.1.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 5.1.1.2 培养基的配制 | 第56页 |
| 5.1.1.3 主要试剂 | 第56页 |
| 5.1.1.4 仪器 | 第56页 |
| 5.1.2 构建方法与策略 | 第56页 |
| 5.1.3 引物设计 | 第56页 |
| 5.1.4 平菇fst3过表达与反义沉默目的基因的克隆 | 第56-58页 |
| 5.1.4.1 平菇fst3过表达与反义沉默基因的PCR扩增 | 第56-57页 |
| 5.1.4.2 PCR回收产物与p EASY-E2原核载体连接 | 第57页 |
| 5.1.4.3 连接产物转化感受态细胞 | 第57-58页 |
| 5.1.4.4 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第58页 |
| 5.1.4.5 序列的分析 | 第58页 |
| 5.1.5 平菇fst3过表达与反义沉默载体的构建 | 第58-59页 |
| 5.1.5.1 阳性质粒与表达载体双酶切、酶连 | 第58页 |
| 5.1.5.2 连接产物转化感受态细胞 | 第58页 |
| 5.1.5.3 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第58-59页 |
| 5.1.5.4 表达载体的鉴定 | 第59页 |
| 5.2 结果与分析 | 第59-66页 |
| 5.2.1 平菇fst3过表达与反义沉默目的基因的克隆 | 第59-64页 |
| 5.2.2 平菇fst3过表达与反义沉默载体的构建 | 第64-66页 |
| 5.3 本章小结 | 第66-67页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第67-69页 |
| 6.1 主要结论 | 第67页 |
| 6.2 讨论 | 第67页 |
| 6.3 后续实验设想 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 英文摘要 | 第76-77页 |
