| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 三七病毒病病原鉴定的研究概况 | 第11-12页 |
| 1.2 PnVY 的发现及其基因组结构 | 第12-13页 |
| 1.3 马铃薯 Y 病毒属病毒简介及部分基因功能 | 第13-15页 |
| 1.4 双生病毒的研究概况 | 第15-17页 |
| 1.4.1 双生病毒的分类、寄主范围及介体传播 | 第15-17页 |
| 1.4.2 双生病毒的危害 | 第17页 |
| 1.5 TYLCCNV 和 TYLCCNB 的研究概况 | 第17-21页 |
| 1.5.1 TYLCCNV 和 TYLCCNB 的生物学特性及其基因组结构 | 第17-18页 |
| 1.5.2 TYLCCNV 和 TYLCCNB 在中国的研究现状 | 第18-20页 |
| 1.5.3 TYLCCNV 在云南的发生分布及其遗传多样性 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 常用分子生物学试剂和仪器 | 第22页 |
| 2.1.2 常用缓冲液及培养基配方 | 第22页 |
| 2.1.3 菌种及载体 | 第22页 |
| 2.2 侵染三七的病毒种类鉴定 | 第22-39页 |
| 2.2.1 三七病叶 dsRNA 的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 cDNA 文库构建 | 第23-28页 |
| 2.2.3 三七病叶的病毒提纯 | 第28页 |
| 2.2.4 提纯病毒的负染、SDS-PAGE 电泳及质谱分析 | 第28-31页 |
| 2.2.5 三七病样总核酸的提取 | 第31页 |
| 2.2.6 PnVY 寄主范围的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 检测引物的序列 | 第32-33页 |
| 2.2.8 RT-PCR 及 PCR 检测 | 第33-34页 |
| 2.2.9 PCR 产物的纯化回收、克隆及序列拼接、确认及提交 | 第34-37页 |
| 2.2.10 TYLCCNV 及 TYLCCNB 对三七的侵染 | 第37-39页 |
| 2.3 三七病毒病田间调查及 PnVY、TYLCCNV 双重 PCR 检测方法建立 | 第39-40页 |
| 2.3.1 三七病毒病田间调查时间与地点 | 第39-40页 |
| 2.3.2 CTAB 法提取总核酸 | 第40页 |
| 2.3.3 双重 PCR 检测方法的建立 | 第40页 |
| 2.3.4 田间样品分子检测统计 | 第40页 |
| 2.4 侵染三七的 PnVY 及 TYLCCNV 不同分离物间全基因组分子变异 | 第40-43页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.4.2 CTAB 法提取总核酸 | 第40页 |
| 2.4.3 引物的设计与序列 | 第40-41页 |
| 2.4.4 RT-PCR 检测、纯化回收，克隆及序列拼接、确认及提交 | 第41-42页 |
| 2.4.5 不同 PnVY 分离物的基因组序列分析 | 第42页 |
| 2.4.6 不同 TYLCCNV 和 TYLCCNB 分离物的基因组序列分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-78页 |
| 3.1 侵染三七的病毒种类的鉴定 | 第43-53页 |
| 3.1.1 可能引起三七病毒病的其他病毒 RT-PCR 检测结果 | 第43-44页 |
| 3.1.2 TYLCCNV 及 TYLCCNB 对三七的侵染 | 第44-49页 |
| 3.1.3 dsRNA 电泳检测 | 第49-50页 |
| 3.1.4 cDNA 文库构建 | 第50页 |
| 3.1.5 电镜观察 | 第50-51页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE 电泳及蛋白质质谱分析 | 第51-52页 |
| 3.1.7 SbDV 的 RT-PCR 检测 | 第52-53页 |
| 3.2 PnVY 寄主范围测试 | 第53-55页 |
| 3.2.1 三七病样 dsRNA 提取产物和提纯病毒的 RT-PCR 检测结果 | 第53-54页 |
| 3.2.2 供试寄主的症状类型及 RT-PCR 检测结果 | 第54-55页 |
| 3.3 三七病毒病田间调查及 PnVY 和 TYLCCNV 分子检测 | 第55-60页 |
| 3.3.1 田间三七病毒病症状类型 | 第55页 |
| 3.3.2 田间三七病毒病的发生特点 | 第55-56页 |
| 3.3.3 双重 RT-PCR 检测体系的初步建立 | 第56-58页 |
| 3.3.4 田间三七病样的 PnVY 和 TYLCCNV 分子检测统计 | 第58-60页 |
| 3.4 侵染三七的 PnVY 及 TYLCCNV 不同分离物的分子变异 | 第60-78页 |
| 3.4.1 不同 PnVY 分离物的基因组全序列分析 | 第60-71页 |
| 3.4.2 不同 TYLCCNV 分离物的基因组全序列比较分析 | 第71-78页 |
| 4 讨论 | 第78-83页 |
| 4.1 三七病毒病可能的其他病原 | 第78-80页 |
| 4.1.1 dsRNA 分析技术 | 第78-79页 |
| 4.1.2 ToMV、CMV 及 SbDV 等三七上可能存在的病毒病原 | 第79页 |
| 4.1.3 TYLCCNV 和 TYLCCNB 对三七的致病性及危害 | 第79-80页 |
| 4.1.4 PnVY 寄主范围的测试 | 第80页 |
| 4.2 双重 RT-PCR 检测 PnVY 与 TYLCCNV 体系的建立 | 第80页 |
| 4.3 三七病毒病的田间调查及症状类型与病毒病原的相关性 | 第80-82页 |
| 4.4 不同 PnVY 分离物编 P1 的氨基酸变异 | 第82-83页 |
| 5 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 附录 | 第90-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 个人简介 | 第96页 |
| 发表的文章及授权专利 | 第96页 |
