| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-32页 |
| 1.1 ErbB2基因概述 | 第17-21页 |
| 1.1.1 ErbB2基因的发现 | 第17-18页 |
| 1.1.2 ErbB2的结构 | 第18页 |
| 1.1.3 ErbB2功能及信号传导通路 | 第18-19页 |
| 1.1.4 ErbB2与乳腺癌 | 第19-21页 |
| 1.2 针对ErbB2基因靶点的药物概述 | 第21-24页 |
| 1.3 Lapatinib对ErbB2阳性细胞的作用 | 第24-27页 |
| 1.3.1 Lapatinib简介 | 第24-25页 |
| 1.3.2 Lapatinib对ErbB2阳性细胞致死原因分析 | 第25-26页 |
| 1.3.3 目前Lapatinib对ErbB2阳性细胞耐药研究主要方向 | 第26-27页 |
| 1.3.3.1 酪氨酸激酶靶点的突变研究 | 第26页 |
| 1.3.3.2 功能代偿途径的研究 | 第26页 |
| 1.3.3.3 糖脂代谢方向的研究 | 第26页 |
| 1.3.3.4 细胞应激方向的研究 | 第26-27页 |
| 1.3.3.5 其他方向的研究 | 第27页 |
| 1.4 肿瘤代谢特点 | 第27-30页 |
| 1.4.1 肿瘤细胞代谢中的关键酶 | 第28-30页 |
| 1.4.2 肿瘤细胞代谢的调控 | 第30页 |
| 1.5 蛋白质组学 | 第30-31页 |
| 1.6 课题研究角度 | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-37页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第32页 |
| 2.1.2 Real time PCR引物 | 第32-33页 |
| 2.1.3 抗体 | 第33-34页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第35-37页 |
| 2.2 试剂配制 | 第37-39页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第37-38页 |
| 2.2.2 细胞给药测试与蛋白提取 | 第38页 |
| 2.2.3 Western Blot | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.3.1 复苏细胞 | 第39页 |
| 2.3.2 细胞一般培养及传代 | 第39-40页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第40页 |
| 2.3.4 细胞处理 | 第40页 |
| 2.3.5 提取细胞总蛋白 | 第40-41页 |
| 2.3.6 BCA法检测蛋白浓度 | 第41页 |
| 2.3.7 Western Blot免疫印迹分析 | 第41-42页 |
| 2.3.8 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-44页 |
| 2.3.9 细胞总RNA抽提 | 第44-45页 |
| 2.3.10 按照试剂盒说明进行逆转录实验 | 第45页 |
| 2.3.11 实时定量PCR(Real-time PCR)反应 | 第45-46页 |
| 2.4 统计学分析 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-97页 |
| 3.1 ErbB2抑制剂GW2974对乳腺癌细胞代谢的影响 | 第47-68页 |
| 3.1.1 GW2974对细胞糖脂代谢的影响 | 第48-56页 |
| 3.1.1.1 对葡萄糖摄取的影响 | 第48-49页 |
| 3.1.1.2 对6-磷酸葡萄糖代谢的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.1.3 对丙酮酸与乳酸代谢的影响 | 第50-51页 |
| 3.1.1.4 对脂肪酸代谢的影响 | 第51-56页 |
| 3.1.2 GW2974对细胞内还原酶的影响 | 第56-61页 |
| 3.1.2.1 细胞质还原酶变化 | 第56页 |
| 3.1.2.2 线粒体还原酶变化 | 第56-57页 |
| 3.1.2.3 过氧化物酶体还原酶变化 | 第57页 |
| 3.1.2.4 内质网还原酶变化 | 第57-61页 |
| 3.1.3 细胞对GW2974的应激反应 | 第61-64页 |
| 3.1.3.1 线粒体应激反应 | 第61页 |
| 3.1.3.2 内质网应激反应 | 第61-64页 |
| 3.1.4 小结 | 第64-68页 |
| 3.1.4.1 GW2974对细胞糖脂代谢的影响 | 第64页 |
| 3.1.4.2 GW2974对细胞还原酶的表达影响 | 第64-65页 |
| 3.1.4.3 细胞对GW2974的应激反应 | 第65-68页 |
| 3.2 GW2974对细胞代谢调控通路的影响 | 第68-77页 |
| 3.2.1 药物靶点(ErbB1/2)与下游信号通路的改变 | 第69页 |
| 3.2.1.1 ErbB2/ErbB1 | 第69页 |
| 3.2.1.2 ERK1/2与AKT | 第69页 |
| 3.2.2 糖脂代谢调控蛋白的改变：AMPKa与P53 | 第69-73页 |
| 3.2.3 小结 | 第73-77页 |
| 3.2.3.1 BT474细胞 | 第73页 |
| 3.2.3.2 SKBR3细胞 | 第73页 |
| 3.2.3.3 MDA-MB-231细胞 | 第73-77页 |
| 3.3 GW2974对细胞凋亡与抗凋亡调控通路的影响 | 第77-84页 |
| 3.3.1 Caspase3 | 第78页 |
| 3.3.2 Caspase9、HSP27、HSP70与STAT3 | 第78-79页 |
| 3.3.3 JNK与NF-κB | 第79-83页 |
| 3.3.4 小结 | 第83-84页 |
| 3.3.4.1 GW2974的凋亡效果 | 第83页 |
| 3.3.4.2 线粒体凋亡途径检测 | 第83页 |
| 3.3.4.3 促凋亡与抗凋亡作用 | 第83-84页 |
| 3.4 GW2974对BT474细胞耐药株(rBT474)的代谢影响 | 第84-97页 |
| 3.4.1 蛋白水平研究GW2974对耐药株代谢的影响 | 第84-90页 |
| 3.4.1.1 双向电泳分析耐药株与母本蛋白表达差异 | 第84-87页 |
| 3.4.1.2 差异蛋白的质谱检测 | 第87-90页 |
| 3.4.1.3 结合双向电泳与质谱鉴定分析耐药株的代谢改变 | 第90页 |
| 3.4.2 mRNA水平检测GW2974对耐药株代谢影响 | 第90-97页 |
| 3.4.2.1 糖脂代谢 | 第90-91页 |
| 3.4.2.2 细胞还原酶 | 第91-92页 |
| 3.4.2.3 线粒体与内质网应激 | 第92-96页 |
| 3.4.2.4 小结 | 第96-97页 |
| 第四章 讨论 | 第97-101页 |
| 第五章 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-116页 |
| 附录 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
