| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1. 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 活性氧 | 第10页 |
| 1.2 活性氧清除系统 | 第10-11页 |
| 1.3 谷胱甘肽过氧化物酶 | 第11-17页 |
| 1.3.1 植物GPX的发现和研究历史 | 第12页 |
| 1.3.2 植物GPX的序列及基因结构特征 | 第12-13页 |
| 1.3.3 植物GPX的表达模式研究 | 第13-14页 |
| 1.3.4 植物GPX蛋白亚细胞定位 | 第14页 |
| 1.3.5 植物GPX蛋白电子供体特异性 | 第14-15页 |
| 1.3.6 植物GPX对过氧化物的特异性 | 第15-16页 |
| 1.3.7 植物GPX催化机制 | 第16页 |
| 1.3.8 植物GPX的功能 | 第16-17页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 2. 基因的克隆和序列分析 | 第19-37页 |
| 2.1 材料与工具 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 火炬松GPX基因的序列鉴定 | 第19页 |
| 2.2.2 油松GPX克隆引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.3 油松总RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.4 DNase Ⅰ处理RNA样品 | 第21-22页 |
| 2.2.5 反转录合成cDNA | 第22页 |
| 2.2.6 扩增油松GPX基因 | 第22-23页 |
| 2.2.7 PCR产物割胶回收与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.8 加A反应及反应产物液体纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.9 连接克隆载体 | 第25页 |
| 2.2.10 转化 | 第25-26页 |
| 2.2.11 感受态细胞JM109的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.12 菌落PCR检测及测序验证 | 第27-28页 |
| 2.2.13 序列相似性分析 | 第28页 |
| 2.2.14 蛋白质的保守结构域分析 | 第28页 |
| 2.2.15 蛋白质的三维结构模拟 | 第28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-36页 |
| 2.3.1 油松芽总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.3 克隆载体的构建与序列的确定 | 第30-33页 |
| 2.3.4 油松GPX蛋白保守结构域的分析 | 第33页 |
| 2.3.5 油松GPX蛋白序列比对与系统发生关系分析 | 第33-34页 |
| 2.3.6 蛋白质结构模拟 | 第34-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.4.1 基因克隆 | 第36页 |
| 2.4.2 蛋白结构模拟 | 第36-37页 |
| 3. 基因的表达模式分析 | 第37-41页 |
| 3.1 材料与工具 | 第37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.2 工具酶与试剂 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 PCR引物设计 | 第37页 |
| 3.2.2 不同部位总RNA提取 | 第37页 |
| 3.2.3 DNase Ⅰ处理总RNA样品 | 第37-38页 |
| 3.2.4 反转录合成cDNA | 第38页 |
| 3.2.5 PCR反应 | 第38-39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 4. 蛋白的酶学性质分析 | 第41-54页 |
| 4.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.2 工具酶及试剂 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-49页 |
| 4.2.1 表达载体的构建 | 第41-45页 |
| 4.2.2 重组蛋白的表达纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.3 酶学活性的测定 | 第46-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-52页 |
| 4.3.1 表达载体构建 | 第49-51页 |
| 4.3.2 蛋白质纯化与酶学性质测定 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 5. 蛋白质关键氨基酸位点功能分析 | 第54-59页 |
| 5.1 实验方法 | 第54-55页 |
| 5.1.1 定点突变 | 第54页 |
| 5.1.2 突变体蛋白表达 | 第54页 |
| 5.1.3 突变体酶学性质检测 | 第54-55页 |
| 5.1.4 氧化还原态检测 | 第55页 |
| 5.2 实验结果 | 第55-57页 |
| 5.2.1 突变体蛋白表达载体构建 | 第55-56页 |
| 5.2.2 突变体蛋白纯化 | 第56页 |
| 5.2.3 PtaGPX3蛋白第80位的Glu的催化特性 | 第56页 |
| 5.2.4 PtaGPX3三个保守Cys的催化特性 | 第56页 |
| 5.2.5 氧化还原态检测 | 第56-57页 |
| 5.3 讨论 | 第57-59页 |
| 6. 总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 导师简介 | 第65-67页 |
| 获得成果目录 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
